[临床医学]组织病理学-增殖与凋亡.pdfVIP

第五章 细胞增殖和凋亡的检测 第一节 细胞增殖测定技术 细胞增殖（cell proliferation）是机体的基本生物学特征，1951年Howard 和 32 Pelc 用 P标记的方法，研究蚕豆根尖的细胞生长和分裂，首次提出了细胞分裂 周期（cell divide cycle）的概念，将细胞增殖周期分为间期（gap phase）和有丝 分裂期（mitosis phase,M 期），前者包括DNA 合成前期（gap 1phase,G1 期）、 DNA 合成期（synthesis phase, S期）和DNA 合成后期（gap 2phase,G2 期），后 者完成细胞分裂产生两个完全相同的子代细胞；在细胞周期中还存在一个G0 期 （图5-1），该期细胞不参与细胞增殖，只有在适当刺激后才可重新加入细胞周期。 根据细胞周期，可将细胞群分为分裂和非分裂两类细胞，前者指进入G1 期后进 行分裂的细胞，后者指处于G0 期及非增殖的终末细胞。分裂细胞与总细胞数的 比值称增殖分数或生长分数，它决定细胞群的增殖活性，测定增殖分数可判断细 胞群的增殖活性。 图5-1 随着细胞化学、免疫组织化学及流式细胞术（flow cytometry, FCM）等技术 的发展，细胞增殖活性已成为生理和病理研究领域最活跃的课题之一。目前，测 定细胞增殖活性的方法很多，常用的方法有下列几种。 一、 核分裂计数 核分裂像是细胞周期中惟一可以用形态学方法识别的时期，在普通光学显微 镜下即能够进行。Baak 提出核分裂的识别标准的为：核膜消失；在核分裂中央 缺乏透明区；核分裂像两侧或外周可见毛发样突起；胞浆嗜碱性。Van Diest 等 亦提出类似标准，并强调要注意区别核分裂与核固缩及胞浆内随机排列的深染小 点状物。 （一）核分裂计数（mitotic figurecounting, MFC）方法 核分裂计数有高倍视野法（high power fields, HPF）和核分裂指数法（mitotic index, MI）。 1 1．高倍视野法 在高倍（×400）下，随机选择多个视野（≥10），分别观 察并计数其中的核分裂像，然后计算出每个HPF中核分裂像的平均值。由于不 同型号的显微镜HPF的面积大小可能存在一定差异，且所测细胞的大小不同， 单位面积内的细胞数亦不相同，该方法存在结果可比性和重复性较差的问题。 2．核分裂指数法 在目镜上加一单线状标尺，计数高倍（×400）视野下与 2 标尺相交的细胞数（n），该视野内细胞总数A=π（n/2）。计数10个高倍视野， 1 5 10 3 3 10 其中第 、 、 视野按上述公式计算， 个视野细胞数之和除以 ，乘以 ， 则为10个视野的细胞总数。以10个高倍视野的核分裂像数除以细胞总数，求得 MI 值。 （二）注意事项 由于M 期是细胞周期中最短的时期，该期细胞占细胞总数的百分率最少， 故MFC 提供的信息量有限；影响MFC 结果的因素亦较多，如核分裂的识别标 准、切片的厚度、组织标本固定时间、切片染色深浅及不同抽样方法等。切片较 厚时，通过显微镜微调可在不同平面计数核分裂像，与较薄切片相比，显然增加 了计数机会；若组织固定不及时，细胞仍有分裂机会，亦会增加核分裂计数的可 能性；切片过染及欠染均会导致核分裂像辨认困难，影响结果。 3 3 3 3 33 33 H thymidine labeling, H -TdR