瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达-食品科学.PDF

※生物工程 食品科学 2017, Vol.38, No.06 1 瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶 基因的克隆与表达 刘晓华，李慧美，柯颖笑，张凯强，李响敏，李 欣，付金衡，李海星* （南昌大学中德联合研究院，食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌 330047 ） 摘  要： c t 以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为 9, 11-共轭亚油酸（conjugated linoleic acid ，CLA ） 的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei ）Fx为出发菌株，提取其基因组DNA ，聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ，PCR ）扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶（linoleic acid isomerase ，LAI ）基因片段，将该基因片段纯 化后进行TA克隆，得到重组质粒pUCm-T-LAI ，将重组质粒pUCm-T-LAI和表达质粒pET-DsbA 同时进行双酶切，连 接得到重组表达载体pET-DsbA-LAI ，经PCR鉴定和酶切后，将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21 中，得到具有LAI c t Lactobacillus casei LAI 活性的重组菌株，能将亚油酸转化为 9, 11-CLA，表明从 Fx成功克隆 ，该研究将有助于深入 了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。 关键词：共轭亚油酸；亚油酸异构酶；干酪乳杆菌；克隆；表达 Cloning and Expression of the Linoleic Acid Isomerase Gene of Lactobacillus casei Isolated from Cattle Rumen * LIU Xiaohua, LI Huimei, KE Yingxiao, ZHANG Kaiqiang, LI Xiangmin, LI Xin, FU Jinheng, LI Haixing (State Key Laboratory of Food Science and Technology, Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China) Abstract: Lactobacillus casei c t Fx was isolated from cattle rumen for its ability to transform linoleic acid into 9, 11- conjugated linoleic acid (CLA). Genomic DNA was extracted and a 1 700-bp linoleic acid isomerase (LAI) gene fragment