实验动物的微生物学控制xxg_-1.pptVIP

实验动物的微生物学控制 普通动物在开放环境中饲养，都会受到自然界微生物、病毒和寄生虫的侵袭，一般都带有细菌、病毒和寄生虫，并感染某些疾病，因此用普通动物做实验，敏感性差，反应性不一致，实验结果不易重复。要提高试验的准确性，必须对实验动物加以微生物学、寄生虫学和遗传学控制，培育出合格的实验动物，使实验结果准确可靠。 国际分类法将实验动物分为普通动物、SPF动物、悉生动物、无菌动物4个等级，见表3—1。不同微生物级别的实验动物在生物医学研究中的应用价值有明显的不同，见表3—2。使用无菌动物、悉生动物及SPF动物和清洁级动物，由于有明确的微生物背景和可控的饲育环境，可大大提高动物实验的重复性和准确性。因此，在高标准的实验室应选用微生物学和寄生虫学质量控制较好的无菌动物、悉生动物或无特定病原体动物做实验。 第—节 无菌动物 无菌动物的概念 无菌动物(germ free)是指无可检出的—切生命体的动物。进一步说是指用现有的检测技术在动物体内外的仟何部位均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。此种动物在自然界中并不存在，必须用人为的方法培育出来。无菌动物来源剖腹产或无菌卵的孵化、一般将临产前的健康动物用麻醉药品或颈椎脱白法处死后．立即浸泡在37℃灭菌液中，送进无菌室(或无菌隔离器)，按无菌手术进行剖腹，切除带胚胎的子宫(产宫内首先应无菌)，将其浸入消毒液里并输送到另一隔离器中，切开子宫取胎，经用灭菌纱布措拭仔体并断脐后，放隔离器内人工喂乳或用其他品系的无菌母鼠做保姆供养。像小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻烦。故采用保姆代养较为方便。而像豚鼠因在一定程度上能自力饮乳，故人工哺乳较容易。 另外，像禽类、鱼类、昆虫类，因是在卵中无菌的前提下进行的，放用药物将卵周围灭菌后移人无菌隔离器内使其孵化即可，而且这些动物—般在出生后能自力采食、故较易育成。无菌动物饲育在无菌隔离器中，经定期检查，证明动物体内外均无一切微生物和寄生虫。实际所谓“无菌”只是一个相对的概念，根据现有的科学知识和检测方法在定时期内不能检出微生物和寄生虫，随着科学技术的发展，现在认为是无菌的动物或许将来可以检出微生物和寄生虫，而不是无菌动物。因此，这个“无”是相对而言的。另外，用大量抗生素也可以使普通动物暂时无菌，但这种动物不是无菌功物。因为这种无菌状态往往是一时性的，某些残留的细菌在适当的条件下又会在体内增殖，即使把体内细菌全部杀死，它们给动物造成的影响却是无法消除的。例如，特异性抗体的存在、网状内皮系统的活化、某些组织成器官的病理变化等。因此，无菌动物必须是生来就是无菌的动物。 三、无菌动物的特点 （一)形态学的改变 1．消化系统 无菌动物和普通动物的外观和活动无差异。无菌动物的盲肠(包含内容物)的总重量可达到体重的25％，盲肠的总重量是普通动物的5—10倍。去掉内容物后的盲肠，无菌动物和普通动物之间并没有多大差别。这是无菌动物盲肠壁伸长变薄的结果。这一现象也从组织学方面得到证实。肠蠕动缓慢，食物通过肠道时间长。 2．血液循环系统 心脏相对变小，白细胞数少，且数量波动范围小。 3．免疫系统 胸腺和淋巴结处于功能较不活跃的状态，脾脏缩小，无二级滤泡，网状内皮细胞功能下降。无菌动物的免疫功能基本上处于原始状态。 （二)生理学改变 1．寿命： 无菌动物的寿命比普通动物长。普通大鼠寿命2年，而无菌大鼠寿命3～4年。 2．营养： 无菌动物体内不能合成维生素D和维生素K。 3生长率： 无菌动物的生长率不同种属不一样，无菌禽类生长率比同种普通动物高； 无菌大、小鼠与普通动物差不多；无菌豚鼠、兔比普通者慢。可能因肠内无菌，不能帮助消化纤维素以提供机体所需要的营养物质。 4．生殖： 无菌条件对动物生殖影响不大。 5. 抗辐射能力强: 以射线照射无菌小鼠的存活时间长于普通动物，普通动物常因败血症而致死。一般认为，这种存活时间的差别，是由于受损细胞的寿命在无菌与普通小鼠之间存在差别的缘故。 6．免疫功能: 由于网状内皮系统、淋巴组织发育不良，淋巴小结内缺乏生长中心，产生丙种球蛋白的能力很弱，血清中IgM、IgG少水平低，免疫功能处于原始状态，应答速度慢，过敏反应、对异体移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失或减弱。 四、无茵动物在生物医学研究中的应用 (一)微生物学研究 1．某些疾病的病原研究 无菌动物可以提供组织培养的无菌组织，可提供具有某一种菌的已知菌动物，以及研究病原体的致病作用与机体本身内在的关系。如猫瘟的形成，正常猫较易感染猫瘟病毒，无菌猫则不易感染，说明感染受肠道微生物的影响。 2．微生物间的拮抗作用研究 菌群之间的拮抗作用是生物屏障的一种。生物屏