Aquaporin4基因敲除对CD1雌性小鼠生殖功能的影响及其机制研究（可编辑）.doc

南京医科大学 硕士学位论文 Aquaporin-4基因敲除对CD1雌性小鼠生殖功能的影响及其机制 研究 姓名:章静 申请学位级别:硕士 专业:药理学 指导教师:胡刚京医葶粤走学硕士学位论文 英文缩略词表 英文缩写 英文全名 中文全名 水通道蛋白弓状核黄体 二酰基甘油 ,, 耐 雌激素,雌二醇 ,动情周期持续时问 “ 咖 卵泡刺激素 ?鲑髓 人绒毛膜促性腺激素 曲 苏未精一伊红?叫下丘脑一垂体一卵巢轴胰岛素样生长因子 眦融 三磷酸肌醇促黄体生成素 拉Ⅵ℃ 汞不敏感性水通道主要内在蛋白, 孕激素,孕酮前列腺素磷脂酶 嘲 ’ 孕马血清促性腺激素 蛋白激酶 视前区 逆转录酶一聚合酶链 二 反应 转化生长因子 州南京医科大学硕士学位论文 .基因敲除对雌性小鼠 生殖功能的影响及其机制研究 水通道蛋白,是一类广泛存在于原核真核生 物细胞膜上,选择性高效转运水分子的特异孔道,对机体的水平衡和 细胞微环境的稳定发挥关键作用。迄今为止,经分子克隆发现的哺乳 动物家族已有个在蛋白质序列上有同源性的成员~ 。其中在脑内的表达最为丰富,主要表达于星形胶质 细胞和室管膜上皮细胞,富集于朝向血管面、软脑膜面和神经突触的 胶质细胞膜区。这种分布特点提示在维持脑内的内环境稳态中 发挥重要作用,它可能是胶质细胞参与脑功能调节的重要结构基础。 在下丘脑弓状核 ,√麟和视前区 ,的星形胶质细胞膜也有表达,和是下丘脑神 经内分泌系统中的重要区域,含有多种神经递质及肽类物质,其中促 ,主要调 性腺激素释放激素订 节垂体前叶的生殖内分泌功能。下丘脑一垂体一卵巢轴 ,加是影响雌性生殖能力的 锄奶. 重要调控因素,在生殖功能中发挥主要的调节作用。①神经元分 泌,调节垂体中促性腺细胞分泌卵泡刺激素? ,,促 ,和促黄体生成素 性腺激素作用于性腺受体,引起性腺激素分泌并影响生殖功能。因此, 位于下丘脑星形胶质细胞膜表面的可能通过调节星形胶质细 胞的功能而影响神经元释放,继而调节下丘脑一垂体一 卵巢轴,最终影响生殖功能。 有研究报道在大鼠的所有腺垂体组织包括嗜碱性、嗜酸 性、嫌色腺细胞及滤泡星形细胞膜上均有表达,分布在这些部位的 可能参与了激素释放的调节过程。因此,分布于嗜碱性内分泌 细胞膜上的也可能直接调节和的分泌过程,进而影南京医科大学硕士学位论丈 响下丘脑一垂体一卵巢轴功能。 目前尚无文献报道对生殖系统功能的影响,涉及到 与生殖相关的研究文献也为数不多,主要集中于研究各种水通道在生 殖生理及病理过程中的表达变化。已有研究发现小鼠妊娠和分娩过程 中,在子宫及宫颈的表达有变化,提示参与调节妊娠和 分娩过程。最重要的是,我们在饲养小鼠的过程中发现,同样 的培育条件下,“小鼠繁殖能力明显强于小小鼠。基于上 述研究背景及发现,本文工作应用基因敲除小鼠,研究 基因敲除对雌性小鼠生殖系统的影响及其相关神经内分泌机制; 阐明对生殖系统的调节作用,为研究生殖能力的调控提供新的 思路。 本文工作首先利用交配实验观察并比较了卅雌性小鼠与 斗雌性小鼠的受孕率及每胎产仔数,结果表明基因敲除 后,雌性小鼠的受孕率及每胎产仔数下降,即雌性小鼠的生殖能力下 降。在此基础上,进行超排卵实验以佐证基因敲除对雌性小鼠 生殖能力的影响。研究发现,雌性小鼠超排卵数、卵泡数及子 宫反应性子宫内膜厚度和子宫重量均低于卅雌性小鼠。此 外,体重及肾上腺重量测定结果表明:基因敲除对生长及肾上 腺系统无影响。形态学观察结果显示:两种小鼠的子宫、卵巢大体形 态无明显差别,但叫雌性小鼠的卵巢囊状卵泡数、黄体数均多 于小雌性小鼠,子宫内膜较雌性小鼠厚,卵巢亦重于 “‘雌性小鼠。 为进一步探讨基因敲除对雌性小鼠生殖功能影响的 机制,本文工作运用二及 技术分别从水平 和蛋白水平观察在垂体、子宫和卵巢的表达,研究结果表明: 在正常生理状态下的垂体、子宫、卵巢,能检测到 水平 转录,但未检测到蛋白水平表达。应用阴道涂片观察动情周期,统计 结果表明:基因敲除并未影响雌性小鼠的动情周期。进一步运 用电化学发光法测定性激素水平显示:小雌性小鼠动情后期的 雌、孕激素水平明显低于”雌性小鼠,提示基因敲除可南京医科大学硕士学位论文 能通过调节功能而降低雌性小鼠生殖功能。 综上所述,本文工作首次研究、阐明了基因敲除对 雌性小鼠生殖功能的影响及其神经内分泌机制。研究结果表明: 基因敲除降低雌性小鼠的生殖能力,提示对 雌性小鼠的生殖系统具有调节作用。通过调节下丘脑一垂 体一卵巢轴的激素水平而影响雌性小鼠的生殖功能。 本文工作的主要创新点: .首次发现基因敲除降低雌性小鼠的生殖功能,提示 对生殖功能具有重要的调节作用,为研究生殖能力的调控 提供新的思路。 .首次提出基因敲除对生殖功能的影响