浓缩果汁（浆）果葡糖浆中羟甲基糠醛的测定方法液相色谱法编制说明.PDFVIP

《浓缩果汁（浆）、果葡糖浆中羟甲基糠醛的测定方 法 液相色谱法》 编制说明 一、工作概况 本标准为 2011 年陕西省第一批地方标准制修订计划下达的制标任务，也是陕西省农业 攻关课题《陕西主要农作物测土施肥及提质增效关键技术研究》（2010k01-19-4 ）及质检总 局课题《特色生态农业出口产品安全质量检测技术研究》（2009IK285 ）的科研输出成果。 制标过程中首先通过查阅相关资料和文献，结合本实验室的前期研究成果和预实验，确 定浓缩果汁中羟甲基糠醛测定的提取净化条件及色谱检测条件。依据方法的检测限及样品中 羟甲基糠醛含量情况确定验证实验的加标水平，对有代表性的样品基质进行室内加标回收率 实验，对检测方法进行室内验证，最后经西安市农产品质量安全检验监测中心、陕西省产品 质量监督检验所、西安市产品质量监督检验院、陕西海升果业发展股份有限公司、山西出入 境检验检疫局技术中心、河北出入境检验检疫局技术中心等 6 家实验室进行方法的室间验 证，本方法的重复性、相对标准偏差均符合要求。 检测方法经验证后形成征求意见稿，广泛征求意见，并进行汇总处理，形成送审稿，经 专业委员会评审通过后形成报批稿。 二、标准编制原则和主要内容 本标准依据 GB/T 1.1 – 2009 《标准化工作导则第 1 部分：标准的结构和编写规则》 和 SN/T 0001-1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规 定》的要求进行编写制订的。 本标准旨在建立浓缩果汁（浆）及果葡糖浆中羟甲基糠醛的液相色谱检测方法，为相关 检测提供检测依据。 本标准方法研究的目的，就是为了建立适用于浓缩果汁样品及水果果糖的样品前处理方 法、仪器测定方法及确证方法。本研究主要针对样品的前处理方法选择和优化、检测及确证 方法的选择和优化进行。 方法验证实验中根据方法测定低限、限量要求样品本底含量等情况确定加标水平，加标 水平必须包括限量要求的水平 （即20.0 mg/kg ），尽可能的包括测定低限水平和样品含量（0 ~30mg/kg ）附近水平，最终确定加标水平为10.0、20.0 、50.0 mg/kg，每个加标水平6平行。 三、主要实验（或验证）情况分析 3.1 提取净化 浓缩果汁及其制品中主要含有糖、有机酸、色素、植物蛋白等物质，含糖量高需要对样 品进行稀释，5-HMF 极性大，易溶于水和甲醇，故采用水稀释样品。直接稀释进样有机酸、 色素干扰大，需要对待测样品进行净化。我们根据浓缩果汁的特点及 5-HMF 的化学性质， 对一些固相萃取柱进行筛选，发现 Bond Elut ENV 、HLB 等固相萃取柱在一定条件下对浓 缩果汁中的羟甲基糠醛有较好的吸附，所以对这些固相萃取柱在浓缩果汁中羟甲基糠醛残留 检测方面的应用进行了进一步的研究。实验发现 Bond Elut ENV 固相萃取柱可重复利用， 且上样后流速较 HLB 小柱快，故采用 Bond Elut ENV 小柱作为净化柱。 选择 Bond Elut ENV 固相萃取柱（500 mg，6 mL ）进行研究，考察了固相萃取净化时 的上样量、淋洗、洗脱条件。 （1）通过初步实验，确定净化过程为：固相萃取柱用 5mL 甲醇，10mL 水活化，浓缩 果汁用水溶解后直接上样，然后用水淋洗，去除糖和部分有机酸。 （2 ）上样量考察：选择浓缩苹果汁为检测样品，分别称取 3.0、4.0g 、5.0g、6.0g 浓缩 苹果汁各 3 份，均添加标准溶液 100μg，均用20mL 水溶解，上样后用水淋洗样品管及固相 萃取柱，最后用 30mL20% 甲醇水溶液洗脱，洗脱液用水稀释定容至 50mL，进样检测，计 算加标回收率，样品量为 3.0g 的回收率为 97.6%、98.9 %、99.1 %，样品量为4.0 g 的回收 率为 99.5 %、99.6 %、99.1%，样品量为 5.0 g 的样品回收率为 95.9%、94.6 %、94.3%， 样品量为 6.0 g 的回收率为 89.9 %、85.6、87.8%，称样量为 6.0 g 时回收率明显低于称样 量为 3.0 g、4.0g 、5.0