11转座遗传分析.ppt

转座同易位是两个不同的概念 易位(translocation)指染色体发生断裂后，通过断端的重接(rejoin)使染色体断片连接在同一条染色体或另一条染色体的新的位置上。 转座则是在转座酶的作用下，转座因子或是复制，或是直接从原来的位置上切离下来，然后插入染色体的新的位置； 或是染色体上的DNA序列转录成RNA，RNA反转录产生的cDNA插入染色体上新的位置，这样，在原来位置上仍然保留转座因子，而其拷贝则插入新的位置，也就是使转座因子在基因组中的拷贝数增加一份。 转座酶由转座子自身编码，并且每次移动时携带转座必需的基因一起在基因组内跃迁，所以转座子又称跳跃基因(jumping gene)。 转座子的特点： ? 不必借助同源序列就可移动的DNA片段，即转座作 用与供体和受体之间的序列无关。 ? 原核生物和真核生物均有转座子。 ? 转座序列可沿染色体移动，甚至在不同染色体间跳 跃。 转座因子的发现 转座元件首先是由B McClintock于20世纪40到50年代中在玉米遗传学研究中发现的。 玉米籽粒的颜色很不稳定，有时籽粒出现斑点，当时她提出一种全新的观点来说明这种现象，她认为遗传因子是可以移动，从染色体的一个位置跳到另一位置，从一个染色体跳到另一染色体，并引起基因活性和功能的改变。这种能自发转移的遗传因子，现在通称转座因子。 但在当时，这一发现并未引起足够的重视，直到1968年，分子水平的研究证实了在E.coli中转座元件的存在，才引起科学家们的重视并进行了深入的研究，她本人也于1984年获得诺贝尔奖。 一、原核转座子的类型 根据分子结构和遗传性质可将原核生物 中的转座因子分为三类： 插入序列 (insertion sequence,IS) 复合转座子(composite transposon,Tn) 转座噬菌体 1. 插入序列（IS） 最简单的转座子，只含与转座功能有关的基因。 IS家族的结构：两端都有短的正向重复序列（direct repeats, DR），略长的反向重复序列（inverted repeats，IR）以及1kb左右的编码区，它仅编码和转座有关的转座酶。 IS转座是一罕见事件，与自发突变处于同一数量级，为每代10-7-10-6 。 目前已知的IS至少有10余种，反向重复序列典型的为15-25bp。经变性和复性后，可以观察到茎环结构 。 对靶的选择有三种形式：随机选择，热点选择和特异位点的选择。 IS的转座过程 首先由转座酶交错切开宿主DNA上的靶位点，靶位点一般是随机的， 然后插入IS，即IS与宿主的单链末端相连， 余下的缺口由DNA聚合酶和连接酶加以填补， 结果使插入的IS两端形成短(2-13bp)的正向重复序列(direct repeat sequence, DR)。正向重复序列的长度因不同的IS而异，但典型的长度介于4~12bp 。 2. 复合转座子（Tn） ? 表示法：通常以Tn和后面加上数码表示，如Tn903 ? 结构: a. 除有转座酶基因外还有其它表型基因， 如：抗药基因，使宿主具表性效应。b. 两侧有重复序列。c. 有的转座子的重复顺序就是IS。 ? 功能：和 IS 一样可以从一个位点转座到另一个位点。 复合转座子两端的臂由IS序列组成。有的二侧组件相同（如Tn903），有的不同（如Tn10）。有的方向相同（如Tn9），有的方向相反（如Tn903，10，5）。有的皆有功能（如Tn903，10），有的仅右侧组件有功能 。 随着中央序列的增长，转座的频率降低。 转座噬菌体 距末端不远处也有类似于IS的序列，但位置不对称。靠近一端处存在与转座有关的A、B基因，它们分别编码70000和33000两种蛋白，在A、B与末端之间有一C区，对A、B有负调控作用。Mu的转座频率比一般的转座子要高，它的两端携带宿主的DNA，而且每一个Mu所携带的宿主DNA都各不相同。在转座过程中，它摆脱两端原有的细菌DNA而转座到新的某个位点上。 二、转座机制 转座子插入到DNA上新的位点，首先交错切开靶DNA，再将转座子连接到靶DNA的凸出单链上，最后填补空缺完成转座。 ???? 使用参差不齐的末端是各种转座子的共同特点。 ?3．保守转座 属于另一种非复制型转座。和非复制型转座的主要区别是在转座过程中供体上转座元件两侧的每个核苷酸键都被保留。另外，采用这种机制的转座子都比较大，而且转座的往往不只是转座子本身，而是连同供体的一部分DNA一起转座。 这种因子的转座酶和λ整合酶家族相关。 注意：某些转座子只具有一种转座机制，而另一些可能具备两种途经,如IS1和IS903 R质粒