[农学]hzau微生物遗传第三章微生物基因突变.ppt

波长范围：136-390nm 诱变有效波长：200-300nm 碱基吸收波长：254nm （诱变效果最强） 紫外线的诱变机制是目前了解得较清楚、应用较广泛的一种非电离辐射的诱变因素。 紫外线（UV：Uitraviolet）的诱变机制 主要引起DNA断裂、DNA分子间或分子内的交联、胞嘧啶与尿嘧啶的水合作用以及嘧啶二聚体的形成等。其中，最主要的生物学效应是引起胸腺嘧啶二聚体形成。 UV的作用机制： X-射线、γ-射线都属于电离辐射，带有较高的能量，能引起被照射物质中原子的电离，故称电离辐射。 室外活体辐射圃 室内辐射源 电离辐射的诱变作用 激光诱变作用 激光和普通光在本质上都是电磁波。普通光源的发光主要是自发发射，激光是激光器内部对光的发射过程进行控制，而产生受激发射。 微生物细胞在He-Ne激光的作用下，产生辐射活化效应，表现为形态结构上的改变，以及生理代谢发生变化。 利用激光对酵母、芽孢杆菌等进行诱变后，都得到较好的效果。 离子束诱变是利用离子注入设备产生高能离子束(40~60keV) 并注入生物体引起遗传物质的永久改变，然后从变异菌株中选育优良菌株的方法。 离子束诱变术 离子注入生物体时，具有能量传递、动量交换、离子沉积和电荷积累的过程。而其它辐射诱变仅仅只有能量交换；化学诱变考虑的也只是分子基团的交换。 因此，离子注入不仅兼有辐射诱变和化学诱变的特点和功能，而且可以通过精确控制离子种类、注入参数，使离子的能量、动量、电荷等根据需要进行组合，使诱变具有一定的重复性和方向性。 第五节 基因突变与DNA损伤的修复 DNA损伤类型很多，细胞内修复系统也不尽相同。根据修复途径和参与酶类，将DNA损伤修复大致归纳为： 光修复 切补修复 错配修复 重组修复 SOS修复等 一、光修复（photoreactivation） 二、切补修复（excision repair） 切补修复：是细胞内一种不依赖可见光来切除胸腺嘧啶二聚体的修复系统，所以也称暗修复。 UvrABC切补修复的机制 三、错配修复（mismatch repair） 错配修复（mismatch repair）是由甲基化引导的修复系统，是大肠杆菌主要修复系统之一。其特点是特异性不强，能修复DNA双链结构中任何轻微的损伤，包括错配、移码、碱基类似物替代等。而DNA的重大损伤则由其它修复系统进行修复。 CH3 利用母链甲基化，子链未甲基化状态 3 MutL将MutS和MutH结合在一起，形成DNA链和三个蛋白复合物 2 MutH则结合到离错配碱基最近的半甲基化位点上 1 MutS识别并结合到错配位点上 5 在DNA多聚酶I和连接酶作用下，以母链为模板合成正确的子链 4 由核酸外切酶从切口处朝错配位点进行降解 由MutH在未甲基化的子链上产生切口 甲基化介导的错配修复机制： 四、重组修复（recombination repair） 重组修复是一种依赖于重组酶（RecA）的修复系统。与光修复和切补修复不同的是，重组修复发生在DNA复制过程中或复制后，而光修复和切补修复均发生在DNA复制之前。 在重组修复过程中，RecA蛋白结合到缺口处的单链DNA上 与相应正常DNA双链形成三链区 由正常DNA双链中的母链与带有缺口的子链进行重组 子链中的缺口由母链替代，而被交换到母链上的缺口则由DNA聚合酶和连接酶进行修复 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 五、SOS修复（SOS response） SOS修复是DNA分子受到较大范围损伤时诱导产生的一种DNA修复系统。它具有复杂的细胞学机制，受到损伤的DNA作为求救信号（save our soul）引发了涉及DNA修复的多种细胞功能参与协调作用。因此是细胞受到危急状态时的修复方式。 由于SOS系统在修复某些DNA时，是在没有模板条件下进行的，因而出现许多错误的修复而引起基因突变。这种修复也是一种倾向错误修复的DNA修复机制，从而导致基因突变。 SOS反应涉及的酶类和修复机制 切除修复的基因：uvrA uvrB uvrC 重组修复的基因：recA 其他基因： lexA umuC umuD lexA 是一种调节基因，其产物是个阻遏蛋白。所有SOS基因的操纵子都含有LexA的结合位点，LexA通过与uvrA uvrB uvrC umuC umuD recA等基因结合而阻遏这些基因的表达。同时对自身基因（lexA）的表达也起抑制作用 recA基因（Clark, 1965）在研究大肠杆菌重组时发现的。recA突变体具有多效性，除重组外，还与DNA修复、细胞分裂等有关。 recA基因产物有两大功能：a, 水解LexA阻遏蛋白，从而使它