[自然科学]GB4789涉及的微生物常规检测技术.ppt

GB4789-2003 34项 GB4789-2008 39项 方法改变12项，新增5项 GB/T 4789.1-2008食品卫生微生物学检验 总则 GB/T 4789.2-2008食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 4789.3-2008食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2008食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 4789.7-2008食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验 GB/T 4789.8-2008食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 GB/T 4789.9-2008食品卫生微生物学检验 空肠弯曲菌检验 GB/T 4789.10-2008食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 4789.27-2008食品卫生微生物学检验 鲜乳中抗生素残留检验 GB/T 4789.30-2008食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB/T 4789.34-2008食品卫生微生物学检验 双歧杆菌检验 GB/T 4789.35-2008食品卫生微生物学检验 食品中乳酸菌检验 GB/T 4789.36-2008食品卫生微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 GB/T 4789.37-2008食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌计数 GB/T 4789.38-2008食品卫生微生物学检验 大肠杆菌计数 GB/T 4789.39-2008食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数 GB/T 4789.40-2008食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 菌落总数测定 大肠菌群计数 霉菌和酵母菌计数 沙门氏菌检验 志贺氏菌检验 副溶血弧菌检验 金黄色葡萄球菌检验 试验器材准备 样品处理和接种 增菌培养 选择性分离平板分离培养 挑选菌落并进行生化试验 生化结果及血清学试验 初步判断 试验器材准备 玻璃器皿清洁 新购的器皿：流水冲洗→1～2%（工业用）盐酸浸泡2～6h →流水冲洗 用过的器皿：直接清洗；高压灭菌后清洗 试验器材准备 消毒和灭菌 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌法—适用于耐热的物品 干热灭菌：干烤箱—适用于在高温下不损坏、不变质、不蒸发的物品（160～170℃持续2h） 试验器材准备 过滤除菌：滤器—适用于对温度不耐受的某些添加物 紫外线：200-275nm，250-270nm；10m2无菌室需装30w紫外灯1只（距台面1m） 试验器材准备 高压蒸汽灭菌效果测定： 留点温度计测试法：160℃，50℃ 化学指示剂测试法：OK试纸 微生物学测试法：可直接取得灭菌效果的数据，是最可靠的方法—嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞菌片（每片含1-5×106），溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水 试验器材准备 紫外线消毒要求： 保持灯管无尘—定期用酒精棉球擦拭紫外线辐射强度不低于70μw/cm2，照射时间≥25min —经常检测紫外线强度。紫外线强度仪 使用时间1000h时—定期更换灯管 菌落总数测定 定义：食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1mL（或1g）检样中形成菌落的总数 菌落总数测定 只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数 不包括厌氧菌、微需氧菌和嗜冷菌及有特殊营养要求的菌 菌落总数测定 计算公式：N=∑C/（n1+0.1n2）d N-样品中菌落数； ∑C-平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1-第一个适宜稀释度平板上的菌落数； n2-第二个适宜稀释度平板上的菌落数； d-稀释因子（第一稀释度） 菌落总数测定-涂布法 大肠菌群计数 定义 大肠菌群：一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 最可能数（MPN）：基于泊松分布的一种间接计数方法 大肠菌群计数 MPN检索表 MPN值：表示样品中活菌密度的估测数，是细菌密度的估计值 MPN测定的最理想结果应是最低稀释度的全部管为阳性，最高稀释度的全部管为阴性 大肠菌群计数 检索表为10倍稀释，设3个稀释度：当按10倍加大或减少接种量时，所得结果按表内数值相应降低或增加10倍 当怀疑水样有严重污染时，可用10倍稀释系列接种3个以上稀释度—应做到最高稀释度至少有1管阴性 表:不同稀释样品确定MPN所需乘积倍数举例 大肠菌群计数 当从表上查不到所得到的阳性管组合时，最好是重新检测或查阅更完整的MPN检索表—表内所列阳性管组合是最为常见的，出现机率为99%以上，未列出的阳性组合，其总数不到1% 大肠菌群计数 MPN法还可用于测定食品中其它细菌，如沙门菌、粪链球菌、亚硫酸盐还原菌等—须选用适合其生物特性的选择性培养基 霉菌和酵母菌计数 培养时间：3d开始，5d结束 培养温度：25℃～28℃ 计数方法：选择菌落数在10