[基础科学]环境微生物实验指导书2012学年-叶劲松.docVIP

《环境微生物学》 实验指导书 叶劲松 编 合肥学院 生物与环境工程系 2010年8月 目录3 实验一 空玻璃器皿的洗涤、包装和灭菌，无菌水的制备 5 实验二 培养基的制备和灭菌 9 实验三 微生物计数、分离培养 12 实验四 光学显微镜使用、微生物形态观察和染色技术 20 实验五 环境表面卫生学指标的测定和特定功能微生物的筛选 24 实 验 室 规 则 实验室是办学的基本条件之一，是师生进行科学实验、开展教研科技活动，培养实验能力的重要场所。进入实验室要自觉遵守纪律不得喧哗吵闹，保持肃静，有秩序地入座。实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。 实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。 配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。 配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缶或冲稀后排放。电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒入废物桶。使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。 实验室内严禁吸烟、饮水和进食， 严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，插好自动部分收集器上的试管，保持实验台面和实验柜内的整洁。每组的仪器和玻璃器皿要用油漆编号，严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。要精心使用和爱护仪器，如使用分光光度计时，不能将比色杯直接置于分光光度计上，并注意拿放比色杯时，不要打碎。仪器损坏时，应如实向教师报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。 实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。每次实验课由班长或课代表负责安排值日生。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作 实验一 空玻璃器皿的洗涤、包装和灭菌，无菌水的制备 目的 1. 掌握玻璃培养皿、吸管、试管和三角烧瓶、载玻片和盖玻片等的洗涤、包装和灭菌。 2. 了解无菌水的制备原理。 3. 了解干、湿热灭菌的原理及应用范围。 原理 清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先觉条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。微生物实验要求无菌条件相当严格，因此器皿需要包装，以防后来染菌。 采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。高温主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要生物大分子发生变性。高温灭菌分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。湿热灭菌的效果比优于干热灭菌。湿热下热量易于传递，更容易破坏保持蛋白质稳定性的氢键等结构，加速其变性。此外，过滤除菌、射线灭菌和消毒、化学药物灭菌和消毒等也是微生物学操作中不可缺少的常用方法。 仪器和材料 玻璃器皿 培养皿、吸管、试管、三角烧瓶、载玻片、盖玻片 仪器 高压灭菌锅、电热烘箱 溶液 2％的煤酚皂溶液（来苏尔）或者0.25％新洁而灭消毒液 其它 洗衣粉或洗涤剂、牛皮纸、报纸、细绳、纱布、普通棉花、细铁丝（牙签）、试管刷、吸耳球、剪刀、试管硅胶塞 洗涤 （1）培养皿、试管、锥形瓶和烧杯等 可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗刷剂刷洗，然后用自来水充分冲净干净。 移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。 装有固体培养基的器皿应该先将其刮去，至垃圾桶中，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2％的煤酚皂溶液（来苏尔）或者0.25％新洁而灭消毒液内24小时或者煮沸0.5小时，再用上法洗涤。带病原