实验七尿中δ-氨基-γ-酮戊酸（δ-ALA）的含量测定 - 华北煤炭医学院.docVIP

华北煤炭医学院 教 案 ： 预防医学系 教研室 ： 劳动卫生与环境卫生学 任课教师姓名 ： 范雪云 姚三巧 沈福海 金玉兰 刘和亮 任课教师职称 ： 讲师 课程名称 ： 职业卫生与职业医学实验 授课时间 ： 2007-2008学年第学期 实验七 尿中δ-氨基-γ-酮戊酸（δ-ALA）的含量测定 授课对象 预防本科 授课时数 4学时 授课时间 第五学年上学期 授课地点 预防系4层实验室 教学 目的 与 要求 1 了解尿中δ-ALA测定的临床意义。 2 掌握乙酸乙酯萃取----对二甲氨基苯甲醛比色法测定δ-ALA的原理和方法。 教学 重点 与 难点 1铅中毒后，尿中δ-ALA升高的机制。 2酚红人工色列替代ALA纯品色列。 3注意该方法的线性范围和检出下限。 教学 方法 1结合实物讲解重点、难点。 2 采用提问、启发互动式教学。 教具 1黑板板书。 2主要参考书、实物。 教学 内容 与 时间 分配 1实验目的 2 min 2临床意义 5 min 3实验原理 5 min 4实验步骤 15 min 5注意事项 5 min 6 学生实验 128 min 思考题或作业 实验报告 教学 参考 资料 1中华职业医学 何凤生主编 人民卫生出版社 1999年8月 2现代劳动卫生学 王移兰主编 人民卫生出版社 1999年8月 3中华劳动卫生与职业病杂志 4职业卫生与职业病杂志 5中国职业医学杂志 6中华预防医学杂志 Key words δ-ALA, urine, lead, phenol red, spectrometer 实验七 尿中δ-氨基-γ-酮戊酸（δ-ALA）的含量测定 --乙酸乙酯萃取--对二家氨基苯甲醛比色法 实验目的 1 了解尿中δ-ALA测定的临床意义。 2 掌握乙酸乙酯萃取----对二甲氨基苯甲醛比色法测定δ-ALA的原理和方法。 临床意义 铅进入机体后，抑制δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶（ALAD）和血红素合成酶。ALAD受抑制后，δ-氨基-γ-酮戊酸形成胆色素受阻，使血中ALA增加，由尿中排出。故测定尿中的含量，有助于了解铅吸收和铅中毒的程度。尿中δ-ALA≥23.8μmol/L或35mmol/24h可诊断为轻度中毒。 实验原理 在PH=4.6及温度为100℃的条件下，尿中δ-ALA与乙酰乙酸乙酯缩合形成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显色剂（对-二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。 器材与试剂 1 器材 分光光度计、水浴锅、电炉、离心机（1500~2000r/min）；具塞比色管10ml 20支、移液管 2ml 1支、吸管10ml 4支、5ml 1支、2ml 2支、离心管10ml 10支。 2 试剂 2.1 乙酰乙酸乙酯。- 2.2 乙酸乙酯。 2.3 醋酸盐缓冲液（PH=4.6）：于700ml水中加入57ml冰乙酸，82g无水乙酸钠。溶解后加水至1000ml。 2.4 对-二甲氨基苯甲醛显色剂：于50ml量筒中，依次加入30ml冰乙酸，1g对-二甲氨基苯甲醛，5ml高氯酸（70%），5ml水，溶解后，用冰乙酸稀释至50ml，混匀，贮于冰箱中保存。 2.5 0.01M四硼酸钠缓冲液(PH=9.2)：Na2B2O7·10H2O 3.8143g用蒸馏水溶解并稀释至1000ml。 2.6 酚红标准溶液：称取酚红0.050g于小烧杯中，加入一滴（约3M）NaOH，用玻璃棒搅拌均匀，以0.01M四硼酸钠缓冲液（PH=9.2））