尿中多环芳烃测定教学教程幻灯片.pptVIP

尿中多环芳烃（PAH)四种羟基代谢物------高效液相色谱法(HPLC) 杨玲 刘丹丹 康静 多环芳烃简介 多环芳烃(PAHs) 是人类最早发现的一类环境有机致癌化合物。PAHs 广泛存在于空气颗粒物和烟熏烧烤类食品中。另外,香烟烟雾中也含有高浓度的PAHs。PAHs 种类繁多、在环境中分布广,主要通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体,经体内代谢转化后,生成DNA 加合物。PAHs 与人们的生活息息相关，在致癌类化合物中占有相当重要的地位。 检测指标 那么如何评估人体内外PAHs的暴露量呢？ 目前使用较多的是生物标志物法，即通过测人体组织或体液中的PAHs或其代谢产物综合反映人体对PAHs的暴露情况。许多生物标记物，包括PAH-DNA、PAH-蛋白质、PAH尿代谢物等，都被用于衡量人体PAHs暴露量。 PAH进入人体后，经代谢形成多种代谢产物。可通过测定尿中四中代谢产物来反应内暴露情况。 2-羟基萘 2-羟基芴 9-羟基菲 1-羟基芘 1—羟基芘是常用的生物标志物，它是芘的主要代谢物，在尿样中通常以葡萄糖醛酸酯和芳基硫酸酯的形式存在。 用HPLC来进行四种物质的定量测定，需在上机前对样品进行严格的处理。 上机前尿样处理步骤： 取尿样6ml于 15ml离心管 离心2000rpm/min 10min 取上清5ml,调PH 5.00—5.09后，加醋酸盐缓冲液 和β-葡萄糖醛酸酶 37℃水浴摇床，14h 离心后，进行固相萃取 固相萃取用的装置 固相萃取用碳18柱 碳18颗粒 第一步：活化（5ml纯甲醇） 第二步：平衡（5ml超纯水） 注意：每一步操作要在上一步 液体到达上筛板之前加入！ 调节滴速 每秒3-4滴 上样 第一步：吸附 （5ml尿样） 第二步：清洗 （10ml超纯水） （10ml30%甲醇） 洗脱 加两次3ml纯甲醇 记录每个试管液面高度（6ml左右） 组分分配在固定相中的浓度 组分分配在流动相中的浓度 K= K值大小与组分的保留时间有关，即与峰形出现的时间有关 分配系数：在一定温度和压力条件下，组分在固定相和流动相之间的分配达到平衡时，组分分配在固定相与其分配在流动相中的平均浓度之比。 高效液相色谱法 是利用高压输液泵驱使流动相（甲醇）通过装填固定相（碳18）的色谱柱，按照固液相之间的分配机制对混合物进行分离的方法。 液固吸附色谱法 在吸附色谱中，组分分子和流动相分子对吸附剂（固定相）表面产生竞争性吸附，利用组分和固定相吸附力的不同而分离。 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 贮液瓶 高压输 液泵 梯度洗 脱装置 色谱柱 高效液相色谱仪的工作流程： 高压泵将贮液器中经过过滤和脱气的流动相经由进样器送入色谱柱，然后从检测器流出。 当注入欲分离的样品时，流经进样器的流动相将样品带入色谱柱中进行分离。分离后的各组分依先后顺序进入检测器，检测器将个组分浓度信号转变为易于测量的电信号，经色谱工作站处理得到色谱图。