[医药卫生]酶工程-专.ppt

酶工程 复旦大学药学院生物合成教研室 酶工程主要内容 第一节 酶工程概述 第二节 酶的分离纯化 第三节 固定化酶工程 第四节 酶传感器 第一节 酶工程概述 1 酶的基础知识及特性 酶的定义和分类 酶的化学特性 酶的催化特性 酶工程 酶工程研究内容 酶工程应用范围 酶工程发展 3 酶的来源和生产 一 酶的基础知识 1酶的定义和分类 酶（enzyme）是由生物体活细胞产生的，具有催化活性和高度专一性的生物催化剂。包括蛋白质和核酸。 酶工程（enzyme engineering）是酶学、微生物学的基本原理与化学工程等有机结合而产生的交叉学科  氧化还原酶类 Oxidoreductases 转移酶类 Transgerases 水解酶类 Hydrolases 裂合酶类 Lyases 异构酶类 Isomerases 合成酶类 Synthetases Synthases 2 酶的特性 绝大多数酶的化学本质是蛋白质，最近发现一些核酸也具有酶活性 ① 酶的分子量很大,酶由氨基酸组成 酶是两性电解质，在等电点易沉淀，酶在电场中能像其他蛋白质一样泳动； ② 导致蛋白质变性的因素，如紫外线、热、表面活性剂、重金属、蛋白质沉淀剂等，都能使酶失活； ③ 酶能被蛋白酶水解而丧失活性。此外，最直接的证据是对所有已经高度纯化的酶进行一级结构分析，结果都表明酶是蛋白质。 单纯酶simple enzyme和结合酶conjugated enzyme 核酶ribozyme 底物大多为RNA，活性主要包括RNA限制性内切酶活性、聚合酶活性、连接酶活性等 核酶是20世纪80年代初美国两位生物化学家Cech和Altman发现并提出的，其化学本质是RNA 可被体内RNase破坏，限制了该酶的直接作用 脱氧核酶deoxyribozyme 1994年以来，随着分子生物学知识和技术的发展，逐渐发现了多种人工合成的具有催化作用的DNA分子 也具有多种活性，如连接酶活性、T4聚核苷酸激酶活性及磷酸酯酶活性 抗体酶abzyme 20世纪80年代后期才出现的一种具有催化能力的蛋白质，其本质是免疫球蛋白 集抗体多样性和酶分子高速催化效能两特点为一体而设计出的蛋白质新产品 1986年美国Schultz和Lerner两个实验室同时在Science上发表论文，报道他们成功地得到了具有催化活性的抗体。 3 酶催化作用的特点 温和性 专一性 高效性 可调性 不稳定性 专一性：强 酶对底物及催化的反应有严格的选择性，一种酶只催化一种反应或一类反应。许多细胞内的酶只作用于一种特定的底物，发生一定的化学反应，这种对底物高度的特异性和选择性称为酶的专一性。 专一性可分为绝对专一性、相对专一性和立体异构专一性。 可调性： 调控机制复杂 酶合成的调节和酶活性的调节 不稳定性 酶的催化作用一般在常温、常压、接近中性pH等较温和的条件下进行。由于大多数酶都是蛋白质，具有蛋白质的结构和生物学特性，因此在高温、高压、强酸、强碱或紫外线等不利的物理或化学条件下，容易使酶蛋白变性而失去催化活性 二、酶工程 酶工程enzyme engineering是酶学、微生物学与生物化工等学科有机结合而产生的新兴边缘学科，也是现代生物技术的重要组成 是一项利用酶、含酶细胞器或细胞作为生物催化剂来完成重要化学反应，并将相应底物转化成有用物质的应用型生物高新技术 化学酶工程：自然酶、化学修饰酶、固定化酶及化学人工酶的研究和应用 生物酶工程 用基因工程技术大量生产酶（克隆酶） 修饰酶基因产生遗传修饰酶（突变酶） 设计新的酶基因合成自然界不曾有的新酶 酶生物反应器和酶传感器 酶工程的核心内容 酶的分离、提纯及大批量生产； 酶和细胞的固定化、酶反应器的研究； 酶的分子改造与化学修饰； 有机相中酶反应的研究； 酶的抑制剂的开发及其应用研究； 模拟酶、合成酶的研究； 抗体酶、核酸酶的研究； 酶的定向进化技术; 酶的应用 酶工程的应用范围 （1）对生物宝库中存在天然酶的开发和生产； （2）自然酶的分离纯化及鉴定技术； （3）酶的固定化技术（酶和细胞固定化）； （4）酶反应器的研制和应用； （5）与其他生物技术领域的交叉和渗透。 其中固定化酶技术是酶工程的核心。实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。? 三、酶的来源和生产 早期酶的生产主要以动植物为原料 以微生物为来源生产酶开始于19世纪末20世纪初Takamine首先利用霉菌来生产商品淀粉酶 微生物种类繁多，酶品种齐全 微生物生长周期短、繁殖快，培养条件简单.生产成本低，培养微生物的原料，大部分比较廉价 微生