[基础医学]核酸免疫进展.ppt

一、概 述 （二）DNA疫苗的构成： 1. 抗原表达基因 2. 真核细胞启动子（如CMV I.E启动子） 3. Poly A 终止序列（如来自SV40 或 BGH基因） 4. 原核细胞选择标志（如青霉素抗性基因） 5. 增强免疫原性的核苷酸序列（如非甲基化CpG二核苷) 二、DNA疫苗载体 1. 裸DNA疫苗：质粒、 MIDGE载体 2. 病毒载体： 天花病毒、腺病毒 3. 细菌载体：减毒活菌苗和繁殖缺陷细菌，如伤寒菌苗、肠炎沙门氏菌苗、志贺氏菌苗、单核细胞增生李斯特菌苗和小肠炎耶尔森氏菌苗 4. 微粒包裹载体：金颗粒(gold particle)、脂质体(liposomes)、聚丙交酯-聚乙交酯（PLGA）、藻酸盐微粒(alginate)、和纳米微粒(nanoparticles) 三、DNA疫苗与常规疫苗的比较 八、DNA疫苗的应用 （一）感染性疾病 （二）肿瘤 （三）自身免疫病与变态反应 肿瘤抗原可被归为四类： ⑴ 个体肿瘤具有的独特抗原 ⑵ 组织学相近肿瘤细胞具有的共同的抗原 ⑶ 组织分化抗原 ⑷ 正常细胞和肿瘤细胞均表达的抗原 DNA疫苗应用于肿瘤 DNA疫苗 肿瘤 B细胞独特型 淋巴瘤 Gp75/酪氨酸相关蛋白－1 黑色素瘤 MAGE,MART 黑色素瘤 前列腺表面抗原 前列腺癌 突变P53基因 P53基因突变引起的 肿瘤 传统免疫方法用于变态反应性疾病治疗的特点: 重复注射、剂量逐渐增加 诱导IgG型封闭抗体 引起变态反应的危险 疗效不稳定 费用高、时间长 被药替代 DNA疫苗用于变态反应性疾病治疗的特点： 主要诱导IgG2a抗体 可中和变应原 诱导较强的Th1应答 抑制抗原特异性IgE合成 和嗜酸性粒细胞的活化 不会引起变态反应 抑制炎症反应 自身免疫病(多发性硬肿症、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病) 有待进一步研究的问题： ◆ DNA疫苗目的基因的选择 ◆ 目的基因的高效表达 ◆ 优良载体的构建 ◆ 诱导适当免疫应答（个体中差异） ◆ 安全性 ◆ 改善制备和纯化工艺 对微生物应答降低 针对自身组织T细胞活化 抗前炎症介质抗体（少量) 前炎症介质（细胞因子、趋化因子） 产生量增加 炎症，组织损伤 中和效应 炎症反应、组织损伤减轻 DNA疫苗 六、核酸疫苗的优化 1、免疫效果的优化 选择高效表达载体 添加DNA免疫激活序列 2、免疫途径的优化 肌肉注射（im） 基因枪导入 皮内(id)和皮下(sc)注射 黏膜表面接种 Effects of CpG motifs on various cells Generation of Immunity after Inoculation of DNA Plasmid with GpG Motifs 2、免疫途径的优化 3、基因佐剂 的应用 细胞因子类 共刺激分子 分子佐剂联合 4、抗原蛋白的泛素化表达 IL-12、IL-15、IL-18及IFN-γ以增强Th1型细胞应答为主。 IL-4加强体液免疫 IL-2能同时加强体液免疫和细胞免疫 集落刺激因子 5、与基因重组疫苗联合应用 细胞因子产生的动态变化 细胞因子产生的动态变化 免疫鼠脾细胞的增殖反应 血清特异性抗体的检测结果 血清特异性抗体的检测结果 S B7 免疫鼠脾细胞的增殖反应 免疫鼠脾细胞的增殖反应 血清的抗NP抗体的测定结果 血清的抗NP抗体的测定结果 七、核酸疫苗的安全性问题 ①局部反应原性和全身毒性研究，即考虑DNA疫苗是否有免疫毒性作用，机体是否对疫苗编码的抗原产生耐受性，或是否导致自身免疫反应，还应对疫苗中污染的细菌蛋白是否诱发抗体产生进行评估； ②遗传性作用，即质粒DNA是否与宿主基因组的整合问题； ③生殖毒性研究，可采用PCR方法对经质粒DNA疫苗免疫的雄性或雌性动物的性腺DNA提取物进行检测 ④致肿瘤性研究，如果质粒DNA疫苗构建具有与人的