病毒感染实验诊断教材_课件.pptVIP

用于病毒的分型诊断最具敏感和 准确性。也可用于检查患者病后 或人工免疫后,机体血清中抗体 增加情况。 3.空斑或蚀斑形成试验 空斑是指在单层细胞中被病毒感染引 起死亡的细胞区域,周围被活细胞包 围。一般而言,一个空斑是由一个感染 性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒 引起的空斑形态和大小不同。可进行病 毒颗粒的计数、纯化,结合中和试验可 进行病毒的鉴定。 4.干扰现象 某些病毒间存在着干扰现象, 如某些型别的鼻病毒能干扰 以后进入的副流感病毒的增 殖,从而阻抑后者的红细胞 吸附作用。 5.红细胞吸附及吸附抑制试验 正粘病毒,副粘病毒感染的宿主 细胞,病毒增殖后产生细胞病变, 但在细胞表面含有病毒某些抗原 成分(血凝素),能吸附鸡、豚鼠 或猴红细胞。 可作为初步鉴定。如果在培养瓶 中加入相应的血凝素抗血清后, 不出现红细胞吸附现象,是为红 细胞吸附抑制试验阳性,可作为 病毒鉴定的依据。 4．血凝试验及血凝抑制试验 某些病毒可与一定种类的哺乳 动物或禽类的红细胞产生血凝 现象。加入相应的血凝素抗体 可抑制血凝现象的发生,是为 血凝抑制试验。可作为病毒型 别确定的依据。 5．病毒的大小及形态 可用电子显微镜观察病毒的 大小及形态。 6．核酸类型鉴别及序列测定 利用5─溴-2-脱氧尿苷(BUDR)抑 制DNA复制的特性,在细胞培养液中 加入该物质,可抑制DNA病毒的复制 和增殖,抑制细胞病变的出现,但对 RNA病毒无抑制作用,以此判断病毒 核酸类型。 对病毒核酸特异序列或全序列的 碱基排列测定或 DNA杂交、DNA- RNA杂交来鉴定病毒。 7．耐酸试验 肠道病毒对酸有耐受力,而 鼻病毒在酸性环境下易被灭活。 8．乙醚敏感试验 病毒外围如有类脂包膜,则易 被乙醚破坏,而失去感染性,不 能感染细胞。可作为病毒是否具 有类脂包膜的依据,也可用氯仿 或去胆酸钠代替乙醚进行试验。 9．免疫荧光抗体染色 将感染细胞固定,用特异抗血 清荧光标记染色,在荧光显微镜 下,可见细胞内荧光,即可确定 型别。 第三节病毒感染快速诊断 通过测定病毒的特异标志成分,如 特殊形态、特异的抗原成分及病毒 的核酸,早期确认病毒的感染,是 病毒学诊断的重大发展。 一、形态学检查 1．光学显微镜 观察病毒感染细胞出现的包涵体。 根据特点可作出辅助诊断。狂犬病 病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或 椭圆形包涵体,称为内基小体。巨 细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出 现周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样 大型嗜酸性包涵体。 2．电子显微镜检查 (1)电镜直接检查:早期病毒感染标 本的病毒颗粒。如“秋季泻”患儿 粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪 便中的HAV,疱疹病毒的疱疹液, HBV患者血清,均可观察到特征性 病毒颗粒。 病毒感染实验诊断 一般原则是特异敏感、快速和简 便。首先根据流行病学和临床特 点,初步判断可能感染的病毒。 然后根据可疑病毒的生物学特点、 机体免疫应答和临床过程,以及 病人当前所处的时机,确定实验 诊断方法。 1.对潜伏期短,发病时尚无抗体产 生,可选择测定病毒颗粒、病毒 抗原或核酸。 2.对潜伏期超过十天的感染,可 检测特异性的IgM抗体来进行早 期快速诊断,及区别初次和再 次感染。 3.对可在体内形成持续感染或潜伏 感染的病毒,可检测急性期和恢 复期双份血清的IgG抗体有无4倍 以上升高,或直接检测病毒核酸。 4.对原因不明或有新病毒感染时, 应采集标本进行病毒分离,同 时应采取双份血清以确认分离 的病毒为病原体。 5.对同一症状可有多种病毒引起的 情况,应同时检测几种相关病毒 的病毒颗粒、抗原或抗体, 6.对由多个型别组成的病毒可测定 它们的共同抗原。 第一节标本采集与运送 一、标本的采集 1.采样时间 尽可能在发病的初期, 急性期或患者人院的当天进行。 2.标本种类的选择 根据临床感染 的症状及流行病学资料,判断可 能感染病毒种类,选择相应部位 采取标本。 常见分离病毒标本的选择 病毒 咽拭子 粪便 血液 脑脊液 唾液 组织 柯萨奇A和B组 + + + 心 单纯疱疹病毒 + 脑膜 腮腺炎病毒