【生物课件】糖化酶.pptVIP

第 四 节 糖 化 酶 本 节 内 容 概　念　和　特　征 菌株的发现及生产应用（了解） 国内外研究情况（了解） 目前的用途（了解） 发酵生产工艺（了解） 糖化酶的一般性质 影响酶活力的因素 生淀粉糖化酶菌种选育 、性质及其应用的研究（了解） 酶的分离和纯化 酶活测定方法（了解） 参考文献 概念和特征： 又称为葡萄糖淀粉酶、淀粉葡萄糖苷酶或糖化型淀粉酶. 是一种外切酶,可以水解淀粉１,4-α-糖苷键或１,6-β-糖苷键生成β-D-葡萄糖,故名. 具有作用及水解生淀粉颗粒的能力 菌株的发现及生产应用 葡萄糖淀粉酶于1945-1950年被日本科研人员从黑曲霉中分离出来发现的，是结晶体。 之后产酸菌株逐渐扩大到雪白根霉（RH izopushivens）、米曲霉和拟内孢霉等。 现在，丹麦等国多采用黑曲霉生产糖化酶；日本采用根霉、拟内孢霉生产；俄罗斯重点研究泥内孢霉的糖化酶生产工艺。 国内外研究情况（了解） 我国糖化酶的研究、生产和应用始于50年代，在酒精工业上所用的糖化剂有黄曲和黑曲霉。 60年代开始研究根霉、红曲霉（Monascussp.）、糖化酶产生菌的筛选、酶性质和发酵条件，并投入了工业化生产。并在此基础上进一步通过诱变育种获得菌株黑曲霉AS3.4309(UV-11)取得了良好的经济效益。 70-80年代在先前基础上诱变获提UV-11-48，产酶活力提高30%。后来继续分离得到的棒曲霉诱变株G987酶活力有提高了42%。黑曲霉AS3.4309的海藻酸钙固定化孢子半连续话发酵生产转化酶的研究也取得了可喜的进展 目前的用途（了解） 主要是在淀粉酶工业、葡萄糖生产、白酒和酒精工业方面.用来制造果葡糖浆、淀粉糖浆、葡萄糖和生产酒精和白酒。 近年来将根霉的糖化酶基因克隆到酵母中，使酶产量达到占酵母蛋白总量的10%，应用基因工程菌生产时，淀粉无须加热糊化，可以直接进行发酵，酒精产率达13%以上。用木薯淀粉生产酒精时，能耗降低30%。 发酵生产工艺（了解） 生产糖化酶的菌种主要是霉菌，我国多采用红曲霉、黑曲霉和根霉，其中根霉以固体培养为宜，红曲和黑曲霉则多以液体深层发酵生产。但根据不同目的也有用固体 培养生产的。 根霉中的常用生产菌有德氏根霉、龚氏根霉、爪哇根霉、台湾根霉、日本根霉、东京根霉等。 糖化酶的固体发酵方法与普通制曲工艺相同。 糖化酶的一般性质 1、最适pH为4-5；最适反应温度为50-60℃ 2、根据不同来源的糖化酶水解淀粉限度分为 3、同一菌株的糖化酶也存在着性质不同的几种成分 影响酶活力的因素 1、酶浓度的影响 2、底物浓度影响 3、pH影响 4、温度 5、反应产物:当葡萄糖浓度大于8mg/ml时对该酶的产生有阻遏作用 6、别构效应 7、激活剂和抑制剂：Ca 对酶有促进作用 生淀粉糖化酶菌种选育 、性质及其应用的研究 研究通过对采样样品筛选，共筛选出对生淀粉作用的菌种约60株。又通过复筛，获得1株生淀粉糖化酶酶活最高的霉菌，选定为出发菌株，酶活约为22U/ml，判定该菌种为无根根霉。通过培养基初步优化，酶活提高到约为80U/ml。通过对出发菌进行紫外和亚硝基胍诱变后，诱变菌株的酶活分别达到200U/ml、300U/ml。 对不同来源淀粉的作用由大到小排列为：粳米淀粉、籼米淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉、糯米淀粉、玉米淀粉、红薯淀粉和马铃薯淀粉。 酶的分离和纯化 以知绝大多数酶是蛋白质，因此酶的分离提纯方法，也就是常用来分离提纯蛋白质的方法． 酶的提纯包括两方面工作： 1、是把酶制剂从很大体积浓缩到比较小的体积。 2、是把酶制剂中大量的杂质蛋白和其他大分子物质分离出去 酶活测定方法 亚碘酸盐法（碘量法） 费林法 3，5—硝基水杨酸法（DNS法） 葡萄糖氧化酶发（NOVO法分光光度测定淀粉葡萄糖苷酶） （补）用萃取化学公司法测定淀粉葡萄糖苷酶 本节内容（回顾） 概　念　和　特　征 菌株的发现及生产应用（了解） 国内外研究情况（了解） 目前的用途（了解） 发酵生产工艺（了解） 糖化酶的一般性质 影响酶活力的因素 生淀粉糖化酶菌种选育 、性质及其应用的研究（了解） 酶的分离和纯化 酶活测定方法（了解） 参考文献 参考文献： １．袁勤生 赵健 王维育，应用酶学，华东理工大学出版社，（１９９４） ２．【德】Ｂ．施特尔马赫 著 钱嘉渊 译，酶的测定方法，中国轻工业出版社，（１９９２） ３．黄文涛 胡学智 译，酶应用手册，上海科学技术出版社，（１９８９） ４．【英】Ｆ．Ｇ．普里斯特 著 张宗玉等 译，细胞外酶，科学出版社，（１９８８） 参考文献： ５．郑集 陈钧辉 著，普通生物化学（第三版），高等学校教材，（２０