携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定.pdfVIP

342 塞旦匿堂盘查!塑年笔!!鲞笙3期 ·基础研究． 携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型 腺病毒载体的构建和鉴定 周炜 冯进渡 王旭平 刘春喜姜虹王荣 丁士芳 摘要 I和舶。I 目的：构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体。方法：应用EcoR 毒，以重组腺病毒DNA为模板，PCR鉴定构建的重组腺病毒。扩增、浓缩纯化重组腺病毒，微量滴定法测定腺病毒 滴度。结果：通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF，酶切分析和测序证明构建正确。经细胞内同源重组构建携 带人VEGF。。基因的重组腺病毒，PCR扩增421bpVEGF。65片段，证实VEGF．。基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒 X109 载体，腺病毒滴度为5．0 pfu／mL。结论：通过双质粒细胞同源重组，生产携带人VEGF，。基因的重组腺病毒，为 动物试验奠定基础。 关键词血管内皮生长因子类： 腺病毒裁体 the Constructionofa recombinantadenovirus humanvascularendothelialfactor165 containing growth gene ZHOU NG NG Wei’，FENG^n-bo，WA Chun—xi，JIANG Xu-ping，LIU Hong，WARong，DING 250012，China ofRadiology，QiluHospital，ShandongUlziyer$ity，止’nan author：DING Corresponding E—mail：dingshifang@yahoo．corn．crt Shi-fang Toconstructarecombinantadenovirus vascularendothelial Objective thehuman 【Abstract】 containing growth factor Plasmid and were withEcoRI andXba 165(VEGFl65)gene．MethodspDC315plasmidpDC·VEGFdigested I。 a of DH50t transformedinto cellstoconstructrecombinant 15一 ligatedtargetfragmentDNA，then competent plasmidpDC3 VEGF．Thewas withrestriction andidentified identified plasmidanalyzed enzymedigestion bysequencing．Theplasmid wasthenc