[医学]5章 沉淀反应免疫学.pptVIP

第5章 沉淀反应 Precipitation 第一节 液相沉淀反应(fluid phase precipitation) 液相沉淀试验 指可溶性抗原与相应抗体在含电解质的液体介质中反应，形成肉眼可见的沉淀物。 液相内沉淀分为 絮状沉淀试验 环状沉淀试验 免疫浊度分析 一、絮状沉淀试验 （一） 基本原理 可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的条件 下，形成可见的絮状沉淀物。 方法：玻片法和试管法。 方法简单 不需特殊设备 灵敏低 已被其它方法取代 二、 环状沉淀试验 (一 )基本原理 将抗原溶液叠加在细小玻璃管中抗体溶液上面，抗原与抗体在两液交界面处特异性结合，形成白色沉淀环 絮状沉淀试验： 方法简单，不需特殊设备 但敏感度较低，已其他方法被取代。 。 第二节 凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation) 凝胶内沉淀试验 可溶性抗原与相应抗体分别放入凝胶内进行扩散，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环，又称凝胶扩散(gel diffusion)。 凝胶内沉淀试验分为 自由扩散： 单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 一、单向琼脂扩散试验 single immunodiffsion （一）基本原理 待测抗原从局部含有相应定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在二者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。 （二）技术要点 制板：将抗体和热融化琼脂混合，倾注成平板。 打孔： 加样：待测抗原和抗原标准品， 反应：置37℃，24～48h后观察孔周围沉淀环。 (三) 数据处理 1．Mancini曲线 适用于大分子抗原，如IgM测定，扩散时间48h. 沉淀环直径的平方（d2）与抗原浓度（C）呈线性关系。 (四) 临床应用 用于IgG、IgA、IgM、C3、C4等定量测定。 简单、特异，但敏感性低，已被其它方法取代 二、双向琼脂扩散试验（double immunodiffusion） （一）基本原理 将抗原和抗体溶液分别放在凝胶不同的对应孔中，让两者均在凝胶中自由扩散，当抗原与抗体相遇，浓度比例适当处形成可见的白色沉淀线。 （二）技术要点 琼脂倾注制板。 待琼脂凝固后，在琼脂胶板上打孔。 在相对的孔中分别加入抗原或抗体。 置室温或37℃18～24h观察沉淀线 。 （三）方法评价 方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。 （四）临床应用 1．血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的Ag或Ab. 在琼脂内扩散的速度受分子量的影响。 如分子量大时，沉淀线弯向分子量大的一边。 如二者分子量相等，则形成直线。 用于抗原性质的分析 分析两种受检抗原的性质是 完全相同、 部分相同或 完全不同。 3．用于抗体效价的滴定 固定抗原的浓度，稀释抗体，经过自由扩散，形成沉淀线，出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。 二、定向免疫扩散 在电场作用下，抗原抗体在介质中发生定向移动的沉淀反应。 定向、加速扩散 分类 火箭免疫电泳 (rocket immunoelectrophoresis) 对流免疫电泳 (counter immunoelectrophoresis) (一)对流免疫电泳 对流免疫电泳 是双向免疫扩散与电泳相结合，在电场中加速定向扩散的双向免疫扩散技术。 1. 基本原理 在pH8.6的琼脂凝胶中， 大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，且分子较小，电泳时，泳向正极。 2.技术要点 制板，在琼脂板上成对打孔，加抗原和抗体。 电泳后观察结果。 3.方法评价 操作简便。 灵敏度较高，比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。 4. 临床应用 常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴定等 (二) 火箭免疫电泳 火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形似火箭，故称为火箭电泳。 1. 基本原理 电泳与反应 抗原在电场作用下，在含有适量抗体的凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯