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WWW.1PPT.COM Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo 胶体金标记 巫泳瑤 2017.04.23 Company Logo Contents 检测模式 最适pH 最适蛋白量与封闭 离心纯化 复溶 Company Logo 检测模式 1.竞争法 2.夹心法 3.间接法和捕获法 双抗体夹心法 双抗原夹心法 竞争法 夹心法 间接法 Company Logo 最适 pH 定义： 在某一pH溶液中，氨基酸或蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH成为其等电点。 pI 等电点 1.pH＜pI，正电荷 2.pH=pI，不带电 3.pH＞pI，负电荷 Company Logo 这种力在免疫反应中的作用最大最强，对于维系复合物起到主要作用，而胶体金与蛋白稳定吸附也很依赖疏水作用力。 （表活） 胶体金表面一圈负电层，蛋白质在标记环境下一些基团是带正电荷的，两者之间通过电荷引力结合。 （低pH和高pH的体现） 蛋白的半胱氨酸可以通过硫基与胶体金表面形成配位键，这种作用力非常强，出现了pH越高，特异性越好的现象。 （硫柳汞） 结合的三种作用力 电荷引力 疏水作用力 配价结合 调节pH目的：带有合适的正负电荷 正电荷：利于结合 负电荷：防止交联死金 Company Logo 最适蛋白量 NaCl滴定法 不适用 盐离子破坏稳定性 封闭剂 封闭的作用 1.封闭金子表面的活跃位点，避免层析中出现假阳 2.稳定标记物 3.提供离心环境 离心纯化 1.去除游离蛋白 2.置换保存液 3.浓缩 上清干净 无不溶颗粒 Company Logo 离心方法 金标结合物 离心过程 一步离心 先低速 再高速 梯度离心 复溶 1.保持金标物液态稳定 2.干燥中稳定，并且之后能够充分释放 配方宜简不宜繁 Company Logo 配伍原则 缓冲体系 BSA 糖 其他 1.合适的pH 2.离子浓度 1.保护标记蛋白 2.封闭金垫 3.流动封闭NC膜 干燥保护剂 表面活性剂 高分子聚合物 酪蛋白 WWW.1PPT.COM Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo Company Logo