色谱分析法第九章_毛细管电泳法简介教材教学课件.pptVIP

色谱分析法 退出 页 出版社 社文分社 * 第九章　毛细管电泳法简介  * 9.1.1简介 电泳(Electrophoresis)是指带电粒子或分子在电场的作用下在导电液体通常是水介质中的运动。毛细管电泳(Capillary Electrophoresis，CE)是在毛细管中实现电泳分离的技术。如图9.1所示，充满了电解质或缓冲液的水性介质的玻璃管的两端与装有相同缓冲液的容器连接在一起，并在这两个容器中插入连有高压电源的两个铂电极。假设有一个样品含有分子大小不同的中性分子和带电离子，而且带电的离子带有不同的电荷。将样品放置在玻璃管的正极端，在整个体系中加上电场，则样品中的离子就趋向于以不同的速度沿不同的方向在管内迁移。迁移的速度和方向取决于离子的尺寸和离子所带电荷的大小和符号。 * 图9.1 毛细管电泳示意图 9.1.2区带电泳 9.1.3引起区带扩散的因素 9.1.4管的直径对对流扩散的影响 9.1.5介质中的电泳 9.1.6毛细管电泳 * 9.2毛细管电泳体系 9.2.1概述 从概念上来讲，毛细管电泳体系比较简单。如图9.2所示，其主要组成有样品池、入口池、出口池、毛细管、检测器、高压电源、数字结果处理设备，如一台分析仪或一台计算机。 图9.2 毛细管电泳体系的系统描述 * 图9.3 毛细管电泳图 图9.4 常见的毛细管电泳进样方法 * 9.2.3源瓶与出口瓶 源瓶有时也称为入口池或入口瓶，终点瓶有时称为出口瓶或出口池。通常情况下，源瓶、毛细管和终点瓶装有同样的缓冲液。 9.2.4毛细管 图9.5 毛细管检测窗口 9.2.5检测器 目前，多种检测器在毛细管电泳中已经得到了广泛的应用，包括：紫外/可见、荧光、激光诱导荧光、质谱、传导、放射和折射率。 * 9.2.6动力供应 所谓的动力供应是为了提供横穿毛细管的驱动力。大多数使用一恒定电场、恒定电流或恒定功率，并且有电场反向功能的模块。 9.2.7数据处理 9.3 毛细管电泳与其他分离技术的比较 高效液相色谱(HPLC)和气相色谱(GC)与毛细管电泳相似，在于这三种方法中数据表示、数据处理和自动化基本相同。Jorgenson曾经将毛细管电泳描述为“电泳的高效分离机理与色谱的设备和自动化概念的混合产物”。 9.3.1效率 9.3.2样品种类 9.3.3进样体积 9.3.4灵敏度 9.3.5试剂要求 * 9.4毛细管电泳分离原理 9.4.1电渗流 在CE中，除了溶质，缓冲液在电场的作用下也沿着毛细管迁移。这种现象被称之为电渗或电渗流(electroosmotic flow，EOF)。在正常模式中，电渗流的方向是由正极向着负极，缓冲液从入口池通过毛细管和检测器到达出口池。 图9.6 溶质通过毛细管的顺序 图9.7阳离子、中性分子、阴离子的电泳谱图 * (1)溶质的电荷 (2)溶质大小 9.4.3电泳参数对分离的影响 影响电泳分离的参数主要有时间、效率、选择性和分辨率。每个分离参数都受一个或多个电泳参数的影响，包括电压、电泳迁移率、电渗流和毛细管长度。 1)时间 2)效率 3)选择性 4)分辨率 9.5毛细管电泳的分离模式 9.5.1毛细管区带电泳(CZE) * 图9.10 CZE中不同组分的迁移示意图 9.5.2胶束电动力毛细管电泳(MEKC) 1)胶束电动毛细管色谱的原理 图9.11 MEKC的分离原理示意图 * 图9.12 胶束电动色谱图 2)MEKC中的保留参数 3)MEKC中的分辨率 4)用MEKC分离离子化溶质 5)在MEKC中使用改性剂 6)其他类型的电动色谱 * 9.5.3毛细管凝胶电泳(CGE) 1)毛细管凝胶电泳原理 2)交联聚丙烯酰胺凝胶 3)线性聚丙烯酰胺凝胶 4)改变电场用CGE分析DNA片段 5)CGE中使用改性剂 9.5.4毛细管等电聚焦(CIEF) 1)毛细管等电聚焦原理 毛细管等电聚焦属于毛细管电泳中的一种聚焦技术类型，其溶质通常是蛋白质，分离基于蛋白质等电点(PI)的差异。毛细管内充满两性电解质和蛋白质溶液，加上一个电场，在毛细管中产生一个pH梯度。各种蛋白质因为它们的等电点不同，而在毛细管内聚焦为许多狭小的区带。毛细管内的溶液在动力作用下通过检测器而产生电泳图。 * 2)毛细管内形成pH梯度 3)等电聚焦 图9.13 CIEF分离机理示意图 4)聚焦区带的活动化 5)CIEF的应用 9.5.5毛细管等速电泳(CITP) 1)CITP的原理 CITP是一种置换色谱的电泳配对物。 * 图9.14 CITP分离机理示意图 2)等速电泳图