2005版《中国药典》微生物限度检查修订内容-辽宁省药品检验所-赫爱平、张雅杰PPT.ppt

●供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培养基的实际用量同控制菌检查方法的验证。 三、药品微生物限度检查法的验证 （一）概述 ● 验证的目的: 确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查。 ● 验证的意义：保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 ● 验证的必要性 理论上要求、试验结果要求 ● 验证的内容 准确性(回收率)、专属性 ●验证的类型 ▲前验证: 建立药品的微生物限度检查法时. ▲ 再验证: 修订的检验方法;供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 ;定期的方法验证. ●验证用菌株：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠 菌、黑曲霉、枯草杆菌。 ●菌株选择的原则:代表性,普遍性,低或非致病性,标准 菌株(或该药品中常见的污染菌)。 ●菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 ●菌液制备:50～100cfu/ml。 （二）细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证 菌液的制备 1．取经37℃培养18-24小时，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、铜绿假单胞菌 10104肉汤培养物、 生孢梭菌 64941硫乙醇酸盐培养物1ml+9ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-7为50~100个/ml，做活菌计数备用 2．取经25℃ 培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml盐水10倍稀释至10-5 ~10-6为50~100个/ml，做活菌计数备用 3．取经25℃ 培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加3~5ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液， 用标准比浊管比浊，与浊度相当后，取1 ml +9 ml盐水=10-1，逐管10倍稀释为10-4约50~100个/ ml，做活菌计数备用 ●验证方法：至少进行3次独立的平行试验 ●试验组 ●菌液组 ●供试品对照组 ●稀释剂对照组 ●结果判断：供试品组的菌回收率、稀释剂对照组的菌回收率。 试验组的菌回收率=[（试验组平均菌落数–供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数 ]×100% 稀释剂对照组的菌回收率=[（稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数）]×100% ●判断标准: 菌回收率均不低70% 。 （三）控制菌检查法的验证 ●试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。 ●阴性对照菌株:设立阴性对照菌是为了验证该控制菌检查方法的专属性。金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌用大肠埃希菌；大肠埃希菌、沙门菌、大肠菌群用金黄色葡萄球菌。 ●菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 ●菌液制备:10～100cfu/ml。 ●验证方法：试验组 阴性菌对照组 ●结果判断：试验组应检出 阴性菌对照组不得检出 （四）药品微生物限度检查法验证试验结果不符合要求的处理方法 ●中和法 ●培养基稀释法 ●薄膜过滤法 ●离心沉淀法 ●联合方法 四、药品微生物限度检查法验证示例 银翘解毒片-金黄色葡萄球菌(常规法) - 试验次数 供试品浓度 回收率% 试验组 稀释剂对照组 1 1:10 92.5 96.3 2 1:10 90.1 94.4 3 1:10 91.1 93.3 银翘解毒片-大肠埃希菌(常规法) - 试验次数 供试品浓度 回收率% 试验组 稀释剂对照组 1 1:10 91.8 97.9 2 1:10 89.8 94.4 3 1:10 90.1 96.7 银翘解毒片-白色念珠菌(常规法) - 试验次数 供试品浓度 回收率% 试验组 稀释剂对照组 1 1:10 91.5 94.9 2 1:10 92.3 96.2 3 1:10 91.5 97.1 银翘解毒片-黑曲霉(常规法) - 试验次数 供试品浓度 回收率% 试验组 稀释剂对照组 1 1:10 92.5 95.7 2 1:10 91.4 98.3 3 1:10 90.8 96.9 银翘解毒片-枯草杆菌(常规法) - 试验次数 供试品浓度 回收率% 试验组 稀释剂对照组 1 1:10 13.1 96.9 2 1:10 15 90 3 1:10 9.7 93.5 2005版《中国药典》微生物限度检查修订内容 辽宁省药品检验所 赫爱平、张雅杰 2005年5月 一、2005年版药典微生物限度标准修订情况 二、2005年版药典微生物限度检查法的修订情况 三、药品微生物限度检查法的验证 一、2005年版药典微生物限度标准修订情况 （一）、2005年版微生物限度标准的制订原则 2000年版：细菌数、酵母菌数和霉菌数按剂型制订；控制菌（致病菌）按给药途径制订。 2005年版：均按给药途