食品检验检疫学5动物性食品中致病微生物和寄生虫的检验检疫教材教学课件.ppt

四、微生物学检验 　　　　　　　　　　　　　临床标本 　　涂片检查　　　　　　　分离培养　　　　　核酸检测　　抗体检测 直接涂片　集菌涂片　　处理标本或无污染标本 　　　染色　　　　液体培养基　　固体培养基　　　　　　　动物试验 　　　　　　　　　　　　　　　（罗氏或米氏） 抗酸..　金胺O.. 　　　　　　　 　　37℃，　　　　 　　　　涂片镜检 　　　　　　　　　仪器培养　　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　＜7天生长　　　＞7天生长 　　　　　　　　　　　　　快速生长菌　　慢生长菌　　　　　　　菌种鉴定 　　　　　　　　　　　　　　　　抗酸染色　　　　菌落特点 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　鉴定试验　　　药敏试验 标本采集 感染部位不同，取不同的标本，宜用能抑制污染菌的方法 常见标本：痰、尿、胸腹水等 检查方法 1.显微镜检查 　1）直接涂片：用萋－尼氏法染色，若镜检找到抗酸性杆菌，通常应报告：“查到抗酸性杆菌”，需进一步分离培养鉴定。 　2）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色检查 分离培养 　 TB菌接种前处理－液化和处理杂菌 4%NaOH、6%H2SO4、胰酶 15-20min 　培养基选择—罗氏培养基 鉴别培养基(PNB、T2H、NAP) 　仪器培养—Bacte460、BacT/ALERT3D 液体培养基 培养时间—长 一般6-8周 鉴定 1.染色性; 2.菌落特征; 3.生长速度; 4.色素产生; 5.生化试验 鉴别试验： NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenome)抑制试验 结核分枝杆菌 NAP- 非结核分枝杆菌 NAP+ 免疫学检测 1.结核菌素试验：OT或PPD 迟发型超敏反应。 　2.全血干扰素测定 　3. 抗体检测 　检测PPDIgG辅助诊断。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体是一种新的较好的诊断结核病的指标。 核酸检测 　快速诊断－－PCR-RFLP、PCR-SSCP、PCR-核酸探针、PCR-核酸测序、多重PCR、双重复插入序列PCR等。 色谱分析技术 　测分枝菌酸 药物敏感试验 动物接种 　菌株分离和检测毒力 结果分析与报告 涂片镜检的报告方式 非典型分枝杆菌 指结核分枝杆菌与麻风杆菌以外的分枝杆菌 已发现17种以上可引起人类疾病，在临床上难以与结核分枝杆菌感染区别 分类 光产色菌：暗处不产色素，光照后产色素 暗产色菌：有光或无光均产色素 不产色菌：有光或无光均不产色素 迅速生长菌：普通培养基上生长 3-6天 光产色菌 堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿分枝杆菌 暗产色菌 瘰痢分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌 不产色菌 鸟-胞内复合分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、蟾分枝杆菌 迅速生长菌 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌 第三节 动物性食品中致病性病毒的检验 口蹄疫病毒 流行性感冒病毒 禽流感病毒 猪瘟病毒 新城疫病毒 马立克氏病病毒 朊病毒 冠状病毒 口蹄疫病毒检验 口蹄疫病毒(Food and mouth disease virus，FMDV)是牛、猪、羊等偶蹄动物口蹄疫的病原。 是全球性最重要的动物健康问题之一。1898年，德国科学家Loeffler与Frosch发现口蹄疫病畜的病料通过滤菌器后→仍能使健康动物发病。 一、生物学特性 口蹄疫病毒属于：微RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)，属内只有口蹄疫病毒一种。二十面体对称，直径20～25nm，无囊膜，病毒基因组为单股正链RNA，在RNA芯髓外对称衣壳上有32个壳粒。电镜下，可见病毒粒子表面的颗粒状结构和一个密度较低的中心。此外尚可见有较小的蛋白质亚单位颗粒，直径7～8nm，无感染性。病毒子在宿主细胞浆内可形成晶格状排列。本病毒是动物病毒中发现最早的一种。 二、抵抗力 对酸敏感，病毒在pH为6.5的缓冲液中、4℃条件下14h灭活90％，在pH5.5时1min灭活90％，在pH5.0时每秒钟灭活90％，pH3.0时瞬间灭活，病毒在pH7.0～7.5时十分稳定。病毒的感染性RNA在pH4.0时较原病毒稳定。口