临床研究计划书课题名称肝硬化患者脾切除加贲门周围血管离断术后.DOCVIP

临床研究计划书 课题名称：肝硬化患者脾切除加贲门周围血管离断术后肠道菌群的变化研究 选题目的和依据（理论意义及应用价值、国内外研究现状、主要参考文献） 国内外研究现状 肠道菌群是一个对人体正常新陈代谢非常重要，是机体最庞大、最重要的微生态系统。健康成人的肠道栖息着1014个细菌，有1000种以上，总量达到1-2公斤，是人体细胞总数的10-20倍，其编码的基因数量是人体自身基因的100倍，称为“被遗忘的器官”[1]。 研究发现，人类肠道菌群参与多种机体生理功能的调节，包括促进机体的免疫发育与成熟[2]，参与中枢神经系统的调节等[3]。另外，肠道菌群的紊乱与许多病理状态相关，包括肥胖[4]、自身免疫性疾病[5]、炎症性肠病[6]、肝硬化[7]、结肠癌[8]等。 肝硬化与肠道菌群 目前研究发现，肝硬化患者肠道菌群是紊乱的，并且与其他伴随肠道菌群紊乱的疾病存在着自身的特点。李兰娟院士通过宏基因组学最终发现，通过15个具有代表性的细菌基因就可以达到诊断该病的目的，也就是说通过辨认肠道菌群的状态可以诊断肝硬化甚至判断病情的严重程度[9]。肝硬化患者为什么会发生肠道菌群紊乱目前还不确定，有可能是胆汁代谢紊乱导致口腔中的有害菌大量在小肠及结肠中繁殖[10]。 肝硬化肠道菌群紊乱与肝硬化的发展以及其并发症的发生有关。肝硬化患者肠道细菌过度生长，并且肠屏障功能受损，这会导致菌群移位从而引起一系列后果，包括内毒素血症、机体的慢性炎症状态[11]、甚至是自发细菌性腹膜炎等严重并发症[12]，这些变化与肝功能及肝纤维化程度的恶化可能有关。 既然肝硬化患者存在肠道菌群紊乱，并且与疾病的严重程度与并发症相关，那么纠正肠道菌群紊乱是否能达到治疗疾病及减少并发症的目的呢? 现已证明，通过口服高选择性抗生素途径改变菌群可达到一定的预期目的。肝硬化伴门静脉高压患者口服诺氟沙星4周后，患者的高动力循环状态有所改善[13]。同样的，服用利福昔明28天后门静脉压力降低，并且伴随的内毒素血症的减轻[14]。 对于我国肝硬化伴门静脉高压患者，疾病发生的早期不易察觉，而一旦发生难以逆转的并发症就需要外科治疗的介入。针对肝硬化门脉高压消化道出血或脾亢患者，目前国内主要采取脾切除加贲门周围血管离断术。动物研究发现，肝硬化鼠脾切除后和未进行脾切除的鼠相比，肝纤维化的程度有所减轻[15]；对于干细胞治疗肝硬化的小鼠，脾切除可加强其治疗效果[16]。对于临床实验也有同样发现，腹腔镜脾切除后门静脉压力降低，并且ET-1和NOx等血管活性因子水平下降[17]。另外有研究发现，术前肝功能B级的患者脾切除一年后肝功能有所改善[18]。这些实验发现肝硬化患者脾切除后病情改善这一现象，而脾切除后是通过什么机制导致的肝功能及肝纤维化程度的改善，是否与肠道菌群有关，这背后存在的机制值得深入研究。 理论意义及应用价值 肠道菌群紊乱与肝硬化的发展有密切关系，本研究通过前瞻性组内对照实验，比较肝硬化患者经过脾切除及断流术后是否存在着肠道菌群及相关指标的统计学差异。探讨术后肠道菌群是否发生改变以及菌群改变对患者病情演变的影响，探索术后肠道菌群的改变及其对肝硬化病情影响的作用机制，为脾切除加断流手术的临床疗效提供更有利的理论基础，并且为将来以肠道菌群为靶点的精确肝硬化治疗进行前期探索。 二、选题的基本内容、构思及初步见解 选题的基本内容及构思： 本研究对比肝硬化患者经过脾切除及贲门周围血管离断术后肠道菌群与术前的差异，并且同时检测术前术后胃肠动力学、5-HT水平、胰岛素抵抗、胃饥饿素及瘦素等相关指标来研究这些指标是否与肠道菌群改变存在着一定关系，从而探索术后肠道菌群改变的可能机制，并且进一步分析肠道菌群在肝硬化发生发展过程中发挥的具体作用。 创新点： 目前研究发现，脾切除后肝功能及肝纤维化有所改善，但机制并不明确。本实验首次研究肝硬化患者脾切除加断流术后肠道菌群的变化情况，并探讨这种改变与肝功能及肝纤维化的改善是否有关。 实验方法及技术路线：（拟采取的主要方法、技术路线、实验方案及可行性分析，可能遇到的问题及解决的办法） 实验的主要方法 1、ELISA实验检测血清、血浆及血小板中5-HT的含量 2、己糖激酶检测血糖、放射免疫法检测血胰岛素 3、ELISA实验检测血液中瘦素及胃饥饿素水平 4、放射性核素现象法检测胃肠动力学 5、16s-rRNA测序研究肠道菌群的多样性、丰度等 6、多普勒超声门脉系统血流动力学检查 技术路线： 拟纳入病例数量： 20例 纳入标准：(1)年龄≥18岁，≤70岁；性别不限； (2)临床诊断为乙肝肝硬化门静脉高压症，出现上消化道大出血，首次外科治疗； (3)胃镜下证实食道静脉重度曲张； (4) Child-Pugh分级为A或B级，评分≤9分； (5) 血小板≤50×109/L；