(精选)【医学课件课件】冠心病的生化致病机理教学课件.pptVIP

冠心病的生化致病机理 吉林大学畜牧兽医学院 06级生物技术2班 李 俊 学号冠状动脉的图片 冠状动脉搭桥术 冠状动脉搭桥术，是让心脏搏出的血从动脉经过所架的血管桥，流向因引起狭窄或梗阻的冠状动脉远端而到达缺血的心肌，从而改善心肌的缺血、缺氧状态。这种心肌血运的重建术，叫作冠装动脉搭桥术。 冠状动脉搭桥术始于1964年，其方法是取自身的下肢静脉或内乳动脉作为搭桥的材料。在体外循环下，使心脏停跳，并在主动脉与冠状动脉病变的远端之间搭桥 冠心病的研究现状 然而，医学上的手术的疗法虽然是简单，实用，但是，给病人带来的痛苦也是巨大的。所以，未来的医学发展趋势必将是一种没有痛苦的温柔疗法。那么，探索冠心病的发病机制，并研制出合理的药物来治疗冠心病就显得十分的必要。以往该病的病因学研究多集中在老年性、遗传性、不良饮食和生活习惯等方面,近年来发现,人类冠状动脉粥样硬化灶病原学上类似于慢性炎症反应,认为微生物感染是冠心病(Coronary heart dis-ease, CHD)的致病机理之一,这一新概念的提出为CHD的预防和治疗提供了新的思路。 肺炎衣原体致病的证明实验 病理学发病机制 利用分子生物学,免疫组织化学或其他的技术可检测人动脉组织中肺炎衣原体DNA,蛋白质或原体。 一些发表的文献表明：病理标本中的50%的动脉粥样硬化病变存在肺炎衣原体。缺血性心脏病患者的动脉硬化斑快中也检测出了肺炎衣原体。体外研究表明，肺炎衣原体可以在平滑的内皮细胞和巨噬细胞中感染和复制，而这些细胞都是动脉粥样硬化斑块的重要的组成成分。 用DNA探针检测肺炎衣原体 用PCR扩增约460bp的肺炎衣原体种特异性基因片段并标记成探针检测肺炎衣原体的方法，其实验的简单过程叙述如下： 1. 菌种的制备(AR-39株肺炎衣原体)； 2.衣原体的培养与纯化； 3.衣原体DNA的提取及PCR的扩增； 4.PCR产物探针的制备； 5.探针的敏感性和特异性； 6.探针用于临床标本的检测。 探针的敏感性和特异性的测定实验 探针敏感性实验: 将AR-39株全DNA进行10倍倍比稀释，分别制成10ng.1ng.100pg.10pg.1pg.100fg.10fg.的斑点膜,用探针杂交,其结果见下图: 表明该探针至少可检出1pg的肺炎衣原体DNA,敏感性较强。 探针特异性鉴定实验 1.Southern杂交。AR-39株全DNA 500ng经Pst酶切后转移到硝酸纤维素膜上,用DNA探针杂交。 2.DNA探针种特异性的鉴定。在Bio-dot吸印仪上制备沙眼衣原体TE55.L2/434./BU株,肺炎衣原体AR-39,VR1310株,鹦鹉热衣原体B11001株,Q热立克次体九里株,嗜肺军团菌LP6.LP8,肺炎链球菌,大肠杆菌,绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌全DNA斑点膜,进行探针的特异性杂交实验. 主要外膜蛋白的基因特性 Montigiani等通过结合基因组学和蛋白质组学的方法 ，首次系统地定义了肺炎衣原体的外膜蛋白。 编码Cpn的 MOMP 的ompA基因的核苷酸序列的分析显示，它是含有1167个碱基的开放阅读框架，编码一个含366个氨基酸残基的蛋白和23个氨基酸残基的前导肽，在ompA基因的5’端游有一个核糖体的结合位点,两个中止子后紧随11个碱基形成茎环结构,这一Cpn序列与Ct血清型L2型的ompA基因有68%的同源性,种间比较发现,Cpn的可变区与其他衣原体只有极少的共同序列,但Cpn却含有C4和Cps所具有的7个高度保守的同源序列。 主要外膜蛋白的抗原表位分析 对Cpn的MOMP的免疫学特性一直存在争议。然而Wolf等的研究证实， MOMP是 Cpn感染期的免疫显性抗原。并提示初次抗体应答反应直接针对MOMP的构像表位。Klein等仔细比对了许多的衣原体表面重组蛋白的种属特异性。 相对分子质量为15000的CrpA，9000的OMP3，6000的OMP2，以及MOMP的4个VD构像的重组蛋白在E.coli 中大量表达,经纯化及Western印记检测后,分别用抗Cpn及抗Ct的病人血清通过微量免疫荧光法检测分析重组蛋白的免役反应性。 主要外膜蛋白的抗原表位分析 结果未发现可以识别Cpn的PorB和OMP3蛋白的血清抗体；抗Cpn的血清可以交叉识别Ct的OMP2，抗Ct的血清可以交叉识别 Cpn的 CrpA，提示有些衣原体的表面蛋白有共同的抗原决定簇。与此对