(精选)RNAi 概述教学课件.pptVIP

Historie 1998 1999 2000 2001 2002 dsRNA efekt u há?átka Objev krátkych RNA rostlin RNAi in vitro Purifikace RISC komplexu Identifikace Dicer RNAi pou?ito proti HIV miRNA fungují jako onkogeny Dnes Plo?ny ?screening“ odhaluje, ?e a? polovina gen? je regulována miRNA 2004 RNAi Rich Jorgensen a kolegové vlo?ili gen produkující pigment do petunií (pou?ili silny promotor) Místo silné pigmentace se objevily rostliny variegované a dokonce bílé Jorgensen pojmenoval tento fenomén cosuppression” Napoli et al., Plant Cell, 1990 Cytoplazmatické siRNA: dsRNA p?edstavující nap?. intermediátní stavy replikace vir? miRNA: negativní regulace specifickych mRNA (gen?) siRNA mediated supression of transcription - potla?ení transkripce prost?ednictvím siRNA R?zné typy a projevy krátkych RNA v buňce Jaky je rozdíl mezi miRNA a siRNA? Funkce obou je regulace exprese siRNA je p?vodem dsRNA siRNA souvisí s cizorodou RNA (obvykle virovou) a je 100% komplementární miRNA je p?vodně ssRNA, která formuje vlásenkové dsRNA struktury miRNA reguluje post-transkrip?ní genovou expresi RNA interference (RNAi) post-transkrip?ní uti?ování gen? (gene silencing) dsRNA je roz?típána na 21-23 nt segmenty (“small interfering RNAs”, ?microRNAs“) enzymem Dicer microRNA (miRNA) Regulace genové exprese Mechanizmus podobny jako u siRNA Obecně zabraňuje vazbě k ribozom?m RNA interference Na základě homologie siRNA nebo miRNA k mRNA zp?sobí RISC komplex degradaci RNA interference siRNAs nebo miRNA je inkorporována do ?RNA-induced silencing complex“ (RISC) Inicia?ní krok ATP ATP ADP + ppi ADP + ppi DICER KINASE RdRP Efektorovy krok Vazba na siRNA siRNA rozvolnění RISC aktivace RISC 2 RNA binding proteins RNA/DNA Helicase RNA-Dependent RNA Polymerase (RdRP) Baulcombe D, Nature, 2004 siRNA miRNA processing He and Hannon, Nature Reviews Genetics, 2004 miRNA and RNAi miRNA RNAi Jak vytvo?it siRNA pro ú?ely genetického in?enyrství Chemická syntéza Vektor exprimují