免疫荧光与免疫组化技术.PPT

病理技术学的内容 大体病理解剖和大体标本的固定制作技术 细胞和组织标本制备的基础知识、原理和技术 电子显微镜的基础知识、原理和技术 免疫组织化学和核酸分子杂交等原位分子检测的理论和技术 分子生物学与病理学交叉应用的有关分子病理的理论和技术 生物芯片技术 细胞凋亡和细胞增生活性的理论和技术 器官移植的组织配型和染色体样本的制备理论和技术 病理技术学的内容 细胞通讯与细胞信号传导的分子机制和技术 原子力显微镜理论和技术 应用动物实验、细胞培养单克隆抗体技术和转基因及基因剔除技术 计算机图像分析，激光共聚焦显微镜以及远程病理技术 显微切割技术 临床细胞学诊断技术及应用 信息病理学和数字切片技术 诊断机器人 关于病理技术的规范化、标准化、质量控制和实验室认证、管理等 一、组织病理学技术与细胞病理学技术 1、组织病理学技术： 是病理学最重要、最基础、应用最广泛的技术，是病理学最重要的组成部分之一，是以研究组织或细胞形态改变为主的各种技术原理、实验操作、结果判定、适用范围和优缺点的学科。 主要包括常规石蜡制片技术、快速冰冻切片技术和组织化学特殊染色技术等。 一、组织病理学技术与细胞病理学技术 2、细胞病理学技术： 是以组织学为基础，研究组织碎片、细胞群团、单个细胞形态和结构以及细胞间比邻关系，并探讨组织来源的一门科学。 从阴道脱落细胞学到非妇科脱落细胞学，再到细针穿刺细胞学，巴氏理论和技术对恶性肿瘤和癌前病变的诊断起了重要作用。近年来，液基膜式薄层细胞学技术和液基离心沉淀式薄层细胞学技术代替传统的巴氏涂片，使宫颈低度病变和高度病变的检出率有了显著提高。 二、免疫荧光与免疫组化技术 1、免疫荧光技术： 通过荧光素标记抗体，并借助荧光显微镜观察荧光的发光物质，主要用于检查、鉴定、定位和示踪各种抗原或抗体成分。 广泛应用于病原微生物检测、肾脏病变、血液病变、基因蛋白的研究，尤其是在病原微生物检测和肾脏病变的准确诊断方面发挥着巨大作用。 二、免疫荧光与免疫组化技术 2、免疫组化技术： 免疫组织化学也称免疫细胞化学，是应用标记抗体寻找组织细胞中抗原的方法来检测组织细胞中化学成分的技术。 目前，免疫组化染色技术已广泛应用于医学科研、临床诊断和鉴别诊断、肿瘤的生物学行为及分型与起源判断、靶向药物筛选、病原体检测等领域 三、分子病理学技术 自20世纪80年代以来，杂交瘤和单克隆抗体、分子克隆、核酸探针和分子杂交、基因组学、转录组学、蛋白组学技术将分子改变的信息与病理形态学密切结合，提供不同病理状态下更详细的分子谱，在病理形态基础上观察疾病过程中分子表达的变化。由此逐步形成了病理分子学技术，并广泛用于疾病诊断和分类、靶向药物的筛选、病原体的检测、遗传学研究等。 三、分子病理学技术 1、原位多聚酶链式反应技术(PCR) 将在冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂片中的核酸片段进行高效扩增，来检测细胞内单一拷贝或低拷贝的待测核酸序列。主要应用于病原体检测，内源基因检测，基因突变、基因重排和染色体易位。 三、分子病理学技术 2、原位杂交技术 用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细胞或组织切片中核酸进行复性、杂交并对其实行检测的方法，称为核酸原位杂交。 广泛应用于医学生物学研究，如基因定位、基因缺失、基因易位、特异基因、整合检测等。 三、分子病理学技术 3、以地高辛或生物素标记的探针和酶的呈色反应进行检测的显色原位杂交技术（CISH） 将基因探针用地高辛或生物素标记，利用过氧化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应在光学显微镜下检测组织mRNA的表达水平。CISH技术可用于检测基因扩增，染色体移位以及染色体计数。尤其在肺癌HER-2基因扩增的检测中得到了广泛应用，而且对对其他肿瘤如卵巢癌和乳腺癌等肿瘤的治疗和预后判断也有重要价值。 三、分子病理学技术 4、以荧光素标记的探针进行检测的荧光原位杂交技术（FISH） FISH是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测核酸反应形成杂交体，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察信号表达，广泛应用于淋巴瘤、骨和软组织肿瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌等肿瘤病理诊断和对临床治疗反应的评估。 四、超微病理学技术 目前，电镜诊断技术已广泛应用于现代临床病理诊断，特别是在传统的临床诊断手段无法确诊的病例中发挥着重大作用。 应用于临床病理诊断中的主要是透射电镜和扫描电镜，前者注重细胞核内的超微结构，后者则用于观察组织和细胞的表面形态。 五、生物芯片技术 生物芯片技术是通过缩微技术，根据分子间特异性地相互作用的原理，将生命科学领域中不连续的分析过程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测。 按照芯片上固化