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The Gram Stain Procedure Step 4 - Rinse Rinse with water to remove excess Iodine The Gram Stain Procedure Step 5 - Decolorizer Drip Decolorizer (80% Methanol +20% Acetone) across the slide about 2-3 sec This removes the outer membrane of the gram negative bacteria, leaches the dye-mordant complex out of gram negative cells The Gram Stain Procedure Step 6 - Rinse Rinse immediately with water to remove excess alcohol The Gram Stain Procedure Step 7 - Counterstain Flood the slide with Safranin solution Let stand for 1 minute The gram negative cell wall will pick up the dye. The Gram Stain Step 8 - Rinse, Dry and Observe Gram-Positive Gram-Negative Rinse with water to remove excess stain Blot dry Observe under Oil Immersion The Acid Fast Stain AFB Stain used to detect: Mycobacterium Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium leprae Nocardia Bacterial Cell Walls GRAM and ACID FAST STAINS Differential Stains Gram Stains and Acid Fast Stains are differential stains (use more than one color) Color should be on opposite sides of the color wheel to make visualization easier What is a gram stain? One of the most important biological staining processes in microbiology Differential stain Used to separate all known bacteria into 2 groups Gram positive Gram negative Dependent upon the construction of the bacterias cell wall The cell will either retain or lose the first dye Cell Wall Of Gram Pos Neg
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