(精编)【医学课件】血清蛋白质醋酸纤维素薄膜教学课件.pptVIP

实 验 5 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜 电泳定量测定 一、目的与要求 了解血清蛋白质电泳分离的原理、方法及临床意义。 二、原理 蛋白质是两性电解质，可带正电荷也可带负电荷。带电荷的蛋白质分子在电场中向相反的电极移动，称为电泳。血清中各种蛋白质在PH 8.6的缓冲液中都带负电荷，在电场中向正极移动。移动的速度主要决定于带电荷的多少和分子的大小。电荷多、分子小，移动就快；反之就慢。因此，利用电泳时各种蛋白质分子移动的速度不同，可将血清蛋白质分成白蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白等几条区带。 三、方法 （一）点样：约2~3μl ——成功的关键！ （二）通电：电压110~130v，电流为 0.4~0.6mA/cm宽，通电45~60min。 （三）染色：氨基黑10B， 3~5min。 （四）漂洗：3~4次，至薄膜底色洗净为止。 （五）定量：取试管6支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中。另于空白部位剪一与白蛋白面积相同的薄膜条放入空白管中。向白蛋白管和空白管中加入0.4mol/L NaOH 4ml，其余各管2ml，需反复振摇使其充分洗脱。30min后，用分光光度计进行比色，波长650nm，以空白管作对照，读取白蛋白及α1、α2、β、γ球蛋白各管的光密度。 四、结果与计算 Tube number album α1、