胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G可能通过G→A突变抑制乙型肝炎病毒的复制.pdfVIP

空1差堕生塑堂塑鱼壁堂盘查2Q盟生2旦釜塑鲞塑!塑￡!一!』丛·!吐-生1婴塑趔，旦些㈣塑咀，!巫塑．堂．! ·135 ．病毒学 胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G可能通过G—A 突变抑制乙型肝炎病毒的复制 张伟张旭照方永明 何智文应松成徐荣臻于晓方 【摘要】 目的研究胞嘧啶脱氨酶APOBEc3c(A3G)对HBv复制的影响及作用机制。方法 1 利用脂质体介导A3G和HBv的直核表达质粒瞬时共转染人肝癌细胞株Hepc2，以空载体pcDNA3 与HBv真棱表达质粒JE转染为埘j}f{，同时转染含增强璎绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒载体以判定 转染效率。共转染附大后用荧光定量PcR方法定最细胞内核壳体(c㈣)相关HBvDNA水平，用 w吲咖blot榆测细胞内A3c和HBt她的表达，并对细胞内c㈣相关HBvl)NAx基川进行P【=R扩增、 T_A克隆和测序，分析互基因中的碱基突变。结果经Ec卯判定的转染效率F均为29％。』0转染 o 9％，共转染2 5腭A3G和05腭T1Bv的IkpG2细胞内core干目关HBvDNA量平均下降为对照的8 皑A3G和o5腭HBV的平均下降为对照的o6％。共转染A3G和HBv表达质粒后，№pG2细胞内 HBv的x基因巾发生c—A突变的数目明显增多，33个克隆中有9个克隆椅测到了16～37个G+A 突变，突变总数达254个，而对照的33个克隆中仅柏2个克隆各检测到2个(}咄突变。进一步的分 析发现，共转染A3G后发生的G，A突变大多集中于儿个热点JX域，突变靶点常存cc二核苷酸巾的 第卟G上。结论胞嘧啶脱氨酶APoBEC3G可能通过诱导HBvDNA的j基因发生c—A超突变， 抑制HBv在人肝癌细胞№—翌中的复制。 【关键词】APoBEc3c；胞啼啶脱氨酶；乙型肝炎病毒；突变 toA删l诅6蛐0f曲V (Wdi眦de叫dna辨AH)BEoGmay辄叩r删I珀Ⅳ坤pli曲6帅tIl】咖曲G x学阻e r唧蚰Z驯怊乳i，ZmⅣG胁抽肿，ⅢG％嘴n1抛，加耽一船n，WwGs0盼。k7w，x￡／舶w如n， Fu爿协扣昭踟r槲h碗姚，＆c0删蜊缸剐砺卿“，＆^。of0，胁托妇，刀I聊甜w￡M㈣蚵．凰7婷hH 3加o。9．Chim o册聊m撕g勰胁r：m皿甜缸昭，凸蚍甜：咖@皿和．如。 T0 WheLher tlta皿瑚自加d 【Abs虹锨】(埘e嘣vei删鹄ti即te APOBEc3C【A3C)㈣IⅡe(hakcyt(mim HBVDNA and I侣V MHbOdsAn A3Gorac呲lL同vec¨pcD— 8l】ppT瑚8 1即lic“on expl℃ssi增vectolencoding NA3．1wasc俨t咖Is如ctedwima Int0hl】11laIl cellljne HBv—pmducir蜒plasrmdh印atoma TTepc丑Meanwkle，a11 vectur inurdefbdete咖etIle e研艄ssing enco出ng#即enfluo瑚cer”epr0把inwasalsoⅡ龇lskctedin【UHeuG2 Ⅱmlde【mone岱cieⅡcvCfdkweI℃harvestedt、mdavsa竹ern-an8f醅“on．andiltmceULdarcore-assoclatedH。E}V DIVAwasex昀ctedPL血edHBVDNAwas bv瑚l—nme was 0n qu趾nifi“l pCR．Wemembh