2018学年高中生物第一部分微生物的利用第2课时分离以尿素为氮源的微生物同步备课教学案浙科版选修.docVIP

第2课时　分离以尿素为氮源的微生物 考试要求 知识内容 考试属性及要求 考情解读 分离以尿素为 氮源的微生物 加试 1.进行微生物分离。使用含有尿素的培养基，采用涂布分离法，分离有脲酶的细菌。 2.使用酚红指示剂检测以尿素为氮源的细菌的存在。 3.说明分离以尿素为氮源的细菌的实验原理。 4.举例说明本实验分离出来的细菌不一定都是以尿素为氮源的细菌。 一、实验目的、原理、设备、用品及材料准备 1.实验目的 (1)使用专一的培养基(含有尿素)分离专一的细菌(有脲酶的细菌)。 (2)利用指示剂颜色的变化检知酶(脲酶)所催化的反应。 2.实验原理 (1)脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作为其生长的氮源。 (2)(NH2)2C＝O＋H2O2NH3＋CO2 3.设备及用品 灭菌锅或高压锅、250 mL的三角瓶1个和100 mL的三角瓶2个、封口膜和橡皮圈、培养皿4个、接种环和玻璃刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有盖的试管(15 mm×150 mm)5支和试管架、移液器。 4.实验材料 (1)在100 mL烧杯中装入50 mL 70%酒精，将玻璃刮刀浸泡在其中。 (2)在100 mL三角瓶中配制好25 mL全营养LB固体培养基(0.25 g蛋白胨，0.12 g酵母提取物，0.25 g NaCl和0.5 g琼脂糖，水25 mL)，加上封口膜后灭菌待用。 (3)在100 mL三角瓶中配制好25 mL尿素固体培养基(0.025 g葡萄糖，0.12 g NaCl,0.12 g K2HPO4,0.25 mg酚红和0.5 g琼脂糖，水15 mL)，加上封口膜后灭菌，待冷却至60 ℃时，加入通过G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10 mL尿素溶液(内含2 g脲)，摇动，混合均匀后待用。 (4)将盛有4.5 mL蒸馏水的5支有塞试管灭菌后待用。 (5)在250 mL三角瓶中装入99 mL蒸馏水，用封口膜盖上，灭菌后待用。 (6)土样1 g(从有哺乳动物排泄物的地方取得)。 1.为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？ 答案　琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量非以尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故而用经纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂。 2.分离以尿素为氮源的微生物实验所用培养基为尿素固体培养基。在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，琼脂糖的作用是凝固剂。 3.微生物要利用尿素需要分泌脲酶，不能分泌脲酶的微生物不能利用尿素。据此该培养基对微生物具有选择作用，其选择机制是只有能够分泌脲酶从而以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。 4.有脲酶的细菌在生态系统稳态中起什么作用？ 答案　如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解，水解后的氨使土壤变成碱性，氨与其他阴离子物质如SO、CO、NO等形成化合物，则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。 5.酸碱指示剂是用来指示反应前后的酸碱性变化的。尿素在被脲酶作用前是中性的，而作用后产生了NH3，变成了碱性，本实验使用酚红作为指示剂，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，变色范围是pH6.4～8.2。培养后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，培养基中的尿素分解产生的氨使培养基变碱性，于是酚红由黄色变成红色，这就表明以尿素为氮源的细菌分泌了脲酶并分解了尿素。圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。 1.在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出(　　) A.乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B.固氮细菌、大肠杆菌、放线菌 C.固氮细菌、霉菌、放线菌 D.固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 答案　C 解析　固氮细菌可以在无氮培养基上生长；青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长，但不会抑制霉菌的生长；加入10%的酚的培养基可以抑制细菌和霉菌的生长，但不会抑制放线菌的生长。 2.下列有关叙述，不正确的是(　　) A.脲是一种有机化合物，含有氮元素 B.地表土壤中含有一定量的脲 C.以尿素为氮源的细菌含有脲酶 D.在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会导致培养基呈酸性 答案　D 解析　根据反应式：(NH2)2C＝O＋H2O2NH3＋CO2，在尿素固体培养基上培养含有脲酶的微生物会产生NH3，从而导致培养基呈碱性。 二、分离以尿素为氮源的微生物 1.实验中的对照设置 (1)实验组