第12讲转基因生物反应器幻灯片.ppt

补充阅读文献1 补充阅读文献2 第3次大作业 分组以下面一个类型产品查阅文献，撰写一份文献阅读报告，并做PPT汇报。 范围： （1）单克隆抗体；（2）病毒疫苗；（3）动物或植物细胞表达重组蛋白药物；（4）转基因动植物生物制药 七组同学：每组6人，分工协作查阅文献，撰写报告（不低于3000字，背景、技术、工艺、影响因素、解决方法或前景展望），制作PPT（15张左右），推举1人讲授PPT（15分钟左右）。 下节内容 微藻培养与应用 预习思考题 与植物、动物细胞相比，微藻在特点和应用上有哪些独特之处？ 三 转基因动物生物反应器 1.转基因动物（transgenic animal）：是指在基因组内稳定地整合外源基因，并且外源基因可以稳定地遗传给后代的基因工程动物。 利用转基因动物生产人类药用蛋白等非常规畜牧产品，是目前世界上转基因动物研究的热点之一 转基因牛 转基因绵羊、山羊和猪 转基因鱼 2.转基因动物培育方法 （1）显微注射法：大片段、应用广 目的DNA制备 DNA的注入原核胚 胚胎体外培养 胚胎移植（移植前鉴定） 发育 出生、鉴定 1980年，Gordon等人首先 育成转生长素基因小鼠。 世界第一个转基因动物。 生长速度快2－4倍、体形 大一倍的转基因”硕鼠”。 发表在1982年的nature杂 志上。 （2）胚胎干 细胞方法 胚胎干细胞（ ES）是一种含 正常二倍染色 体的具有发育 全能性的细胞 ，因此只要将 外源DNA导入 胚胎干细胞就 可以实现基因 的转移。 3. 乳腺生物反应器（Mammary gland bioreactor） 将外源基因置于乳腺特异性调节序列之下，使之在乳腺中表达，然后通过回收乳汁获得重要价值的生物活性蛋白的技术。 1987 年Gordon 等将组织型纤溶酶原激活剂(tPA)与小鼠乳清酸蛋白(WAP)基因的启动子构成重组基因，成功地培育出了37只在乳汁中能表达tPA 的转基因小鼠. 2006年6月2日，世界上第一个利用转基因动物乳腺生物反应器生产的基因工程蛋白药物——重组人抗凝血酶Ⅲ（商品名：ATryn ）上市获得批准。 目前，α1-抗胰蛋白酶(AAT)、人乳球蛋白、凝血因子Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、纤维蛋白原、降钙素、SOD、红细胞生成素、IGF-1等成功表达，多种药用蛋白已经进入临床试验阶段。 上海交通大学医学遗传研究所： （1）1998年中国首头转基因羊。乳汁中表达人凝血因子IX蛋白。人凝血因子IX是治疗血友病的药物。 （2）1999年，带有人血清白蛋白基因的转基因试管牛——“滔滔”降生。 （1）乳腺生物反应器优点 1）生物学活性和功能与天然蛋白完全相同（经过充分的修饰加工，具有稳定的生物活性）。 2）对动物的生理影响较小（乳腺是一个外分泌器官，乳汁不进入体内循环。 3）表达产量高、表达产物的提纯相对容易、生产成本相对较低。 4)表达产品的安全性好。 （2）关键环节 使用合适的乳汁蛋白基因调控元件，构建合理有效的乳腺组织特异性表达载体。 目前应用于乳腺特异性表达载体构建的乳蛋白基因及调控序列的主要有： 乳清酸蛋白(WAP）基因及其调控序列。 酪蛋白(Icasein)基因及其调控序列。 β-乳球蛋白(β-lactoglobulin)基因及其调控序 列。 乳白蛋白(α-lactalbumin )基因及其调控序列。 （3）鉴定 目的基因的鉴定：检查动物体内是否有外源基因的存在，以判明是否是转基因动物。可用聚合酶链反应(PCR)、斑点杂交(Dot bloting), Southern印迹分析等多种方法进行检测。 目的蛋白的鉴定：建立动物乳腺生物反应器的最终目的是得到有活性的外源蛋白，因此，对目的蛋白的检测非常重要。检测方法主要有： (1) SDS－聚丙烯酰胺凝胶(SDS) (2) 酶联免疫吸附实验(ELISA) (3) Western印迹分析 问题 （1）理论基础薄弱和技术不完善，致使转基因在受体动物基因组随机整合，遗传不稳定、表达率不高。 （2）异位表达和表达产物的泄漏问题，需要乳腺组织特异性高效表达载体，保证外源基因在乳腺中专一表达。 （3）在家畜转基因技术方面，目前多用原核胚胎显微注射，平均成功率比较低，需要大量的供体和受体动物。 4 动物血液生物反应器 外源基因在血液中表达的转基因动物叫血液生物反应器。大家畜的血液容量较大,利用动物血液生产某些蛋白质或多肽等药物己取得了一定进展。外源基因编码产物可直接从血清中分离出来,血细胞组分可通过裂解细胞获得。 血液生物反应器比较适合生产人血红蛋白、抗体和生产非生物学活性状态的融合蛋白,而有活性的蛋白或多肽(如激素、细胞分裂素、组织血纤维溶酶因子等)由于进入了动物血液循环系统而影响动物的健康。到目前为止,已有多种通过转基因动物生产的具有生物学