细胞实验技术-课堂-实验七技术介绍.pptVIP

细胞生物学;;;第一节 流式细胞术（FCM）测定细胞周期 和 真核细胞转染 第二节 总结;流式细胞术（FCM）测定细胞周期;细胞生长和增殖;DNA Synthesis;根据细胞周期可将高等动物细胞分为3类： ①连续分裂细胞。 ②休眠细胞，暂不分裂，适当刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞。 ③不分裂细胞，又称终端细胞，不再分裂。;细胞周期测定;4N;流式细胞仪;基本工作原理;流程;1. 制备单细胞悬液 ？;结果？;G2;FOUR CHECKPOINTS;G2;流式细胞术（FCM）测定细胞周期;特点：;小结;真核细胞转染 ;脂质体转染法;Plasmid;脂质体转染法 流程;电转法:高脉冲电压瞬间破坏膜电位，DNA通过膜小孔进去。 病毒：病毒侵染细胞。 磷酸钙-DNA共沉淀法：磷酸钙-DNA共沉淀物，可使DNA附在细胞表面，被细胞内吞。;影响因素： 1.细胞的状态与密度 2.转染的质粒 3.血清等其它影响因素 4.操作影响 4. 48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。 ;脂质体转染绿色荧光蛋白质粒结果