天然产物抗氧化性检测方法汇总文件.ppt

Company Logo 天然产物抗氧化活性测定方法 抗氧化的两种定义 食品体系中：抗氧化是能够阻止或延缓食品的氧化，用 于提高食品的稳定性及延长储藏性 生物体系中：能够明显阻止和延缓被氧化物质的氧化， 其中被氧化物质包括脂类、蛋白类、糖类以及DNA 抗氧化的天然产物 抗氧化活性 抗氧化能力 常用的抗氧化能力评价方法: 1、对底物脂质过氧化抑制能力 2、对特定的自由基的清除能力 3、对底物的还原能力 带来问题： 各有特色 各有优势 各有局限 无法正常评价的原因： 1)抗氧化活性的化学测定方法无法真实模拟生理环境，没有考虑药物跨膜进入细胞、药物吸收及其与载体或酶等生物大分子之间的相互作用 2)体内新陈代谢作用大大增加了活性物质抗氧化能力的不确定性，未考虑代谢毒性及生物有效利用性 3)生物体抗氧化反应途径多样复杂，各体系间相互作用 4)抗氧化剂与生物体液一般是混合的，其中每一种物质对不同测量方法的贡献不同 5)测定的样品大多为植物提取物，成分复杂，其抗氧化作用无法用单一的机制解释 6)抗氧化活性还受很多因素如在水相和有机相间分配效应、氧化条件和环境以及氧化底物物理状态等的影响 天然产物中抗氧化的物质 抗氧化活性研究模型 体外模型 Diagram 2 Diagram 3 Diagram 2 Diagram 3 细胞损伤模型 体内模型 体外测定方法分类 1、抗脂质氧化 2、清除和抑制自由基 3、测定还原能力 4、其他方法 测定方法 抗脂质氧化类型检测方法 基本原理： 脂质中的不饱和脂肪酸自动氧化，生成不稳定的氢过氧化物，氢过氧化物继续 分解形成短碳链的醛、酮、酸等小分子化合物。抗氧化剂的加入可以延缓氢过氧 化物及其分解产物的形成，由此可测得抗氧化活性。 常见方法： 过氧化值(peroxide value，PV)法 共轭二烯过氧化物法 硫氰酸铁法(ferric thioeyanate method，FTC) 硫代巴比妥酸法(thiobarbituric acid，TBA) 2，4-二硝基苯肼法 克雷斯实验法(Kreis test) 茴香胺值(anisidine value) 抗脂质氧化类型检测方法 测定氧化前期的有PV法/共轭二烯过氧化物法/FTC法 测定氧化后期的有TBA、克雷斯实验法/茴香胺值法 抗脂质氧化方法原理 常见 清除和抑制自由基方法 基本原理： 体内自由基过剩，会对机体产生损伤。通过测定抗氧化剂清除自由基的能力来评 价抗氧化活性 A A.自由基 +氧化体系 抗氧化物质 A 激发 荧光 自由基体系 A 产生 抗氧化物质 常见方法： 1、ABTS、DPPH法、DMPD法、Fremy自由基和galvinoxyl法 2、氧自由基吸收能力(ORAC)法、清除抗氧化能力(TRAP)法、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法、总氧自由基清除能力(TOSC)法、化学发光法、藏花素漂白法、B一胡萝卜素漂白法、总氧自由基清楚能力（TOSC） 自由基的分类 涉及到总抗氧化性测定的方法 清除抗氧化能力(TRAP)法 氧自由基吸收能力(ORAC)法 二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法 总氧自由基清楚能力（TOSC） 藏花素漂白法 TRAP法和ORAC法 两种方法均利用在自由基会抑制某种蛋白产生荧光，抗氧化剂的出现会抑制这种抑制作用的产生，利用荧光强度反应抗氧化活性 TRAP是一种常用的检测血浆和血清体系的总抗氧化能力的方法，检查的是非酶类的抗氧化物质 缺点：反应滞后时间与抗氧化能力不总是成正比例 ORAC法该法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，主要检测抗氧化物质对由AAPH产生的过氧化自由基的清除效果。该过程发生在37℃下，借助氢原子的转移来实现。 缺点：仪器设备较复杂，检测成本较高 二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法 DCFH-DA(二氧荧光素二乙酸酯)法也是测定总的自由基清除能力。AAPH产生的过氧自由基氧化DCFH-DA生成DCF(dichlorofluorescein，二氯荧光黄) 。DCF有很强的荧光，在504 nm有吸收，因此可用荧光法或分光光度法检测。 总氧自由基清楚能力（TOSC） TOSC(自由基清除能力)法是一种相当新的测量体外抗氧化活性的方法。此法是根据过氧自由基、过氧化氮或·OH将KMBA氧化生成乙烯，生成的乙烯可用顶空气相色谱检测。在有抗氧化剂存在时，抗氧化剂与KMBA对过氧自由基竞争反应，乙烯的形成被部分地抑制。 藏花素漂白法(crocin bleaching test)  藏花素漂白法(crocin bleaching test)用于测定复杂混合物和食品的抗氧化能