环境工程微生物学综合实验-功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与研究.doc

环境工程微生物学综合实验- 功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与性能研究 实验须知* 一、环境工程微生物学实验目的 1. 通过实验进一步加深理解课堂讲授的理论内容。 2. 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，建立无菌概念并掌握无菌操作技术。 通过实验，培养学生分析问题、解决问题的能力及创新能力，提高学生的综合素质，为将来能够独立工作打下坚实的基础。 二、环境工程微生物学实验基本要求 1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，弄清实验目的、原理及操作步骤，以免手忙脚乱，影响实验课效果。 2. 实验前，按内容要求仔细检查所需仪器、药品是否齐全，若有问题及时提出。 3. 整个实验过程要严格按操作步骤进行，不得马马糊糊，否则会造成错误，甚至出现事故。 4. 实验过程中要做好记录，特别是对于连续观察的实验，必须认真记下每次观察到的现象与结果，然后进行整理分析，写出实验报告。 5. 使用贵重精密仪器时要特别小心，注意保护，用毕要复原，并进行登记。实验使用的一切物品实验完毕均放回原处。损坏仪器照价赔偿。 6. 实验室要保持整洁、干净，不准大声喧哗，勿随意走动，严禁吸烟，不许吃东西，不准随便乱丢废物。 7. 实验过程中，一些易燃品如乙醇、丙酮等切勿接近火焰。如遇火险，要先切断火源，再用沙土或湿布灭火，必要时应使用灭火器。 8. 使用过的废液及琼脂培养基不得直接倒入水池内，应先进行灭菌处理，然后再将废液倒入下水道，将琼脂培养基埋掉。 9. 离开实验室前要将桌面擦净，清扫卫生，检查电源、火源、自来水、门窗是否关闭，以确保安全。 实验一、 絮凝菌分离、筛选准备实验 （器皿的包装、无菌水、培养基的制备与灭菌） 一、器皿的包装 （一）实验目的 学会微生物技术实验中所用器皿的包装方法及意义。 （二）包装方法 1.培养皿的包装 用牛皮纸或旧报纸进行包装。包好后灭菌备用。 2. 吸管的包装 在已干燥的吸管的平头端距0.5cm处，塞长约1.5cm的棉花，松紧要合适。过松，棉花易脱出；过紧，吹吸费力，甚至吹吸不动。棉花的作用是防止吸管中的细菌吸入口中，同时又防止口中的细菌吹入管中。将塞好棉花的吸管的尖端，放在裁成4cm ~ 5cm宽的长报纸条的一端，吸管与纸条约成45o角。折叠纸角，包住吸管尖端，然后以螺旋式在桌面上用力向前搓转，纸条将吸管包紧，余下的纸尾打成结。将这样包好的几根或几十根吸管放一起，再用一张牛皮纸或两张报纸包装，然后干热灭菌。 3.三角瓶的包装 在三角瓶的瓶口上塞上合适大小的瓶塞（棉塞或泡膜塑料塞），在瓶口外面 包上2层至 3层报纸，扎好灭菌。若进行湿热灭菌，最好再包一层牛皮纸或铝铂，以免打湿棉塞。 二、培养基的制备与灭菌 （一）实验目的 1．掌握培养基和无菌水的制备方法。 2．掌握高压蒸汽灭菌技术。 3．了解灭菌前的准备工作。 （二）材料 1．培养皿（直径9cm）4套、移液管（10毫升、1毫升）、三角瓶（250毫升、150毫升、50毫升）、烧杯、量筒（100毫升）、漏斗、漏斗架； 2．牛皮纸（或报纸）、纱布、棉花； 3.玻璃珠、蒸馏水(配培养基用)； 4.分离培养基：营养琼脂培养基； 5.筛选培养基{发酵培养基（g/L）20 g , KH2PO4 2g , K2HPO4 5g , (NH4) 2SO4 0.2g ,NaCl 0.1g ,尿素0.5g ,酵母膏0.5g）。 5.高压蒸汽灭菌锅、摇床、烘箱、电炉、冰箱等。 （三）操作步骤 1．无菌水的制备 在150mL三角瓶中加90mL蒸馏水，放20粒 ~ 40粒玻璃珠（用以打碎污泥颗粒，使其中的微生物游离出来），塞上硅胶塞，包扎好，灭菌备用。 2.培养基的制备 （1）制备培养基的过程及要求 ①配制 取一合适的干净烧杯，先加入一定量的蒸馏水，按培养基的配方依次称取各 种成分，并依次加入蒸馏水中。在有石棉网的电炉上加热，用玻璃棒不断地搅动，待药品全部溶解后，补加蒸馏水至所配体积。若配制固体培养基，将琼脂加入继续搅拌，以防糊底。 ②分装 将配好的培养基分装于三角烧瓶中。分装时培养基不能滴到瓶口上，以防瓶塞被污染。分装量视需要及容器大小而定。液体培养基的高度为容器高度的1/4～1/3。 （2）肉膏蛋白胨琼脂培养基的制备 按说明称取一定量的营养琼脂培养基于250毫升三角瓶中，根据（1）进行配制，趁热分装，塞好棉塞，包上牛皮纸，扎好，灭菌。 3.高压蒸气灭菌 高压蒸气灭菌法是利用高压蒸气锅进行灭菌的方法。高压蒸气灭菌锅有自控式和非自 控式两类。实验室通常采用的是非自控式高压蒸气灭菌锅。非自控式高压蒸气灭菌锅又分为手提式和卧式两种，其结构和基本原理相同。压力锅上主要有压力表、加水口、排水口、安全阀、放气阀等；热源有电炉、煤气或蒸气。 高压蒸气灭菌锅的操作步骤及注意事项： （1）加水