药物分析-药物定量分析与分析方法验证.pptVIP

一、基本要求 例　三氯叔丁醇的含量测定 例：泛影酸（卤素原子与芳环相连,化学键牢固） (二) 光谱分析法 光谱 光谱分析法 分光光度法 分类 紫外-可见分光光度法 红外分光光度法 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法 火焰光度法 （一）血液 测定药物浓度指测定血浆或血清中的药物浓度 采集→制备血浆或血清 贮藏：短期4℃、长期-20 ℃ （二）唾液 采集：自然分泌 贮藏： 4℃以下 （三）尿液 用于药物剂量回收研究，尿清除率、生物利用度等的研究 采集：自然排尿，时间尿，一定时间内排泄的尿液全部储存起来，记录体积 (二) 生物样品分析前处理技术 为什么要对生物样品进行前处理？ 蛋白质的去除方法？ 常用的分离、纯化方法？ 被测组分的浓集方法？ 1. 去除蛋白质 释放结合型药物、减少提取过程中乳化、保护仪器、提高灵敏度 加入与水混溶的有机溶剂 中性盐 强酸 加入含锌盐、铜盐的沉淀剂 酶解法 2. 缀合物的水解 酸水解/酶水解 3. 有机破坏 测定生物样品中的金属离子，常用HNO3-HClO4作为消解剂，一般得到高价态金属离子 4. 分离、纯化和浓集 使被测物在所用分析技术的检测范围内，常用萃取法 液-液萃取法（LLE） 液-固萃取法（LSE） 相当于缩小的柱色谱法 浓集 末次萃取液尽量少 挥去萃取溶剂 5. 化学衍生化 可使药物：具有能被分离的性质 提高灵敏度 增强稳定性 提高对光学异构体分离的能力 ② 标准偏差（standard deviation, SD或S） S =[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2 ③ 相对标准偏差(relative standard deviation, RSD) RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X ×100% (2) 验证内容 ① 重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度. ② 中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。 ③ 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。 (3) 数据要求 均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限 精密度试验结果的RSD允许数值: 容量分析、重量分析法 0.3% ~ 0.5% ; 氧瓶燃烧法 ≤ 0.5% ; 紫外、原子吸收分析法 ≤ 1.5% HPLC、GC分析法 ≤ 2% TLC分析法 ≤ 2% 3 专属性 (specifity) 指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性 鉴别、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性 (1) 鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品，均应呈现负反应。 (2) 含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。 图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。 在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。 在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。 4 检测限 (limit of detection, LOD) 指试样中被测物能被测出的最低量.是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。 ① 非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物试验出能被可靠地检测出最低浓度或量. ② 仪器分析信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法. 以3倍信噪比（S/N=3)相对应浓度确定检测量. 5 定量限 (limit of quantitation ,LOQ) 指样品中被测物能被定量测定的最低量.（应具有一定的准确度和精密度） 杂质和降解产物进行定量测定时，要求LOQ。常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。 6 线性 (linearity) 指在一定的浓度范围内,测试结果与供试物浓度呈正比关系的程度. 浓度 应包括一定梯度的5~8个浓度.对于含量测定要求浓度上限为样品最高浓度的120%,下限为样品最低浓度的80%,但应高于LOQ. 方法 用作图法或计算回归方程建立. Y=ax+b r=0.999 回归方程的相关系数（r）越接近1，表明线性越好 如UV：制备一个标准系列，浓度点n=5