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全自动定量易Western 服务客户手册 上海欧易生物市场部 2016 年10 月 一、平台介绍 Simple Western 系统作为一个划时代的蛋白质分析技术，自从2011 年底由美 国加州 Proteinsimple 高科技公司推出以来，获得了广泛好评和认可，Nature 【】 1 Methods 率先报道该技术 。目前全球重要的研究机构大多已经拥有该技术平台, 如约翰霍普金斯大学、哈佛大学、斯坦福大学、耶鲁大学、加州大学戴维斯分校、 加州大学圣地亚哥分校、华盛顿大学等。 传统的 Western Blot 法需要投入大量的时间和精力，采用新型的 Simple Western 设备Wes 可实现全自动化，微量上样，且定量准确。该仪器设备目前已 推向国内市场，但价格过百万，2016 年欧易生物利用该设备为中国科研客户推 出全自动易Western 检测服务，快速高效获得精准的检测结果，让国内科研工作 者率先体会美国最新科技成果。 传统Western 缺点 全自动定量易Western 优点 1、操作繁琐，涉及制胶、跑胶、转膜、 1、不用制胶，跑胶，转膜，减少实验步骤， 封闭、孵育、显色，各个步骤都有失败 避免样品损失。 的可能，若无丰富经验，难以获得预期 2 、自动化程度高，检测结果的精确性高和 结果。 重复性好。 2 、重复性差，结果重现性不好。 3、单个样品上样体积3-5ul，节约珍贵样品。 3、无法实现准确定量，为半定量检测。 4 、检测灵敏度高，低至pg 级。 4 、样本上样量较大 （50-100μ g ），不适 5、完成后给出详尽的分析数据，包括目的 合原代细胞，干细胞，激光显微切割， 蛋白大小、信噪比、峰面积和含量，可对结 针孔穿刺样本等珍贵样本。 果自动进行精确的定量分析。 1 图1 Simple Western 系列之Wes 仪器展示 图2 样本板示意图 2 二、Wes 仪器工作原理 采用微量样品管，结合专利的内涂层技术，可以从样品中分离捕获蛋白质， 并通过后续的免疫反应和化学发光检测定量目的蛋白。上样、分离、固定、免疫 放大和化学发光检测的整个过程在 Wes 上自动完成而无需人工干预，上机时长 为3 小时。 图3 Wes 检测原理图 三、技术指标 1、检测方法：化学发光法 2 、灵敏度：pg 级 3、动态范围：3 logs 4 、蛋白分子量检测范围：12-440KD 5、结果具有高度重复性：CV≤10% 6、结果分析：蛋白分子量大小、信噪比、百分比和峰面积 7、结果呈现形式：化学发光成像得到的峰型图结果和泳道式结果 3 8、定量分析：给出标准曲线，可绝对定量分析 （需提供标准品） 四、样本准备方法 1 临床组织 a)首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写 明样本编号； b)准确切除所需组织后，立即剔除非研究所需的组织，并将组织分割成小块； c)用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本； d)放入准备好的冷冻保存管中，迅速投入液氮冷却。然后转入-80℃冰箱中保存； 2 动物组织 a)首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写 明样本编号； b)准确切除所需组织后，立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织，务 必将组织分割成小块； c)在生理盐水或PBS 中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物； d)用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本； e)放入准备好的冷冻保存管中，迅速投入液氮冷却，然后转入-80℃冰箱中保存。 3 植物组织 a)准确取得所需组织后，立即用准