分析化学系列课件 紫外-可见分光光度法学习课件(PPT课件).ppt.pptVIP

11.4.3 光电比色法 显色反应的类型：配位反应、氧化还原反应、缩合反应、重氮化偶合反应 显色反应的要求 化学计量关系确定 组成恒定，化学性质稳定 选择性好(??max≥60nm) 试剂和产物的吸收区别明显(??max≥60nm) 灵敏度高(?=103~105) 可见分光光度法：对能吸收可见光的有色溶液进行测定的方法。 光电比色法的显色反应条件 试剂（显色剂）：灵敏度、稳定性、选择性 用量：一般过量；影响产物组成 NH4SCN作显色剂测Fe3+： 0.01mol/L： Fe3++SCN-→Fe(SCN)2+ 淡红色 0.1mol/L： Fe3++2SCN-→Fe(SCN)2+ 淡血红色 ≥0.2mol/L：Fe3++4SCN-→Fe(SCN)4- 血红色 溶剂 控制：条件实验(A-C) 影响物质对光的吸收 显色反应产物稳定性 控制：有机溶媒可提高生成物稳定性 酸碱度 酸度过大：影响配合物离解 酸度太小：金属离子水解沉淀 不同pH范围：生成配合物颜色不同 控制：条件实验(A-pH)；缓冲溶液 时间 时间太短：反应不完全 时间太长：有色配合物再次分解 控制：条件实验(A-t) 温度 影响反应速度 合适温度：促使正反应迅速完全；防止副反应发生 控制：条件实验(A-T) UV-vis定量分析方法小结 单组分定量分析方法 吸光系数法 校正曲线法 对照法 多组分定量分析方法 双波长法 导数光谱法 光电比色法 （单色光较纯） （单色光不纯） （线性关系较好） （等吸收双波长消去法、系数倍率法） （显色反应条件） UV-vis定性及结构分析 定性鉴别的一般方法（光谱比较法） 纯度检测方面的应用 有机化合物结构研究 UV-vis定性鉴别 定性鉴别的依据： 吸收峰数目 吸收峰位置?max 吸收峰强弱?max 吸收光谱形状 吸收光谱的特征 定性鉴别的一般方法：标准对比法 比较光谱特征数据——?max、 ? min、 ? sh 比较A（或?max ）的比值 比较光谱一致性 对比吸收光谱特征数据 安宫黄体酮(M=386.53) 炔诺酮(M=298.43) ?max=240±1nm ?max=240±1nm 3 3 4 4 对比吸光度（或吸光系数）比值 适用：存在几个吸收峰的样品，可消除仪器、浓度、厚度或其它原因造成的误差。 V-B12鉴别：?max=278、361、550(nm) 中国药典规定：A361/A278 = 1.7~1.88 A361/A550 = 3.15~3.45 对比吸收光谱的一致性 三种甾体激素的紫外吸收光谱 (10?g/ml甲醇溶液） 醋酸泼尼松 醋酸氢化可的松 醋酸可的松 杂质检查 UV-vis纯度检测 吸收峰位置：化合物无吸收→杂质有吸收→检出 吸光系数变化： 化合物强吸收 吸收光谱变形 杂质无(弱)吸收→吸光系数↓ 杂质吸收更强→吸光系数↑ 杂质限量检测 吸光度上限值 肾上腺素与肾上腺酮的紫外吸收光谱 ?max=310nm 肾上腺酮 肾上腺素 峰谷吸光度比值 药典规定：C=2mg/ml,l=1cm, ?max=310nm,A≤0.05 杂质 吸收峰处无(弱)吸收 吸收谷处有吸收 UV-vis结构研究简介 有机化合物的紫外吸收光谱 饱和碳氢化合物：?→?*，?短，远紫外区 化合物 ?max(nm) ?→?* n→?* CH3OH 150 180 CH3Cl 157 173 CH3I 180 255 不饱和脂肪族化合物 孤立双键：CH2=CH2( ?max=193nm) 共轭双键：CH2=CH—CH=CH2(?max=220nm, ?104) ?E?E? 最低占有轨道 最高空轨道 →跃迁几率↑→?↑ C=C 共轭 C=C (?→?*) ; ?E↓→?↑ 含孤立助色团和生色团的饱和有机化合物 孤立助色团： n→?*跃迁， ?长 孤立生色团： n→?* (275~295nm), n→?* (~190nm), ?→?*(150~180nm) α、β-不饱和醛、酮、酸和酯 共轭C=C：K带(?max=200~260nm， ?104) C=O：R带(?max=310~350nm， ?100) 共轭→K带、R带都长移 酸、酯的K带比醛、酮长移得多 酸、酯的R带比醛、酮长移得少 芳香族化合物 苯和取代苯 苯 吸收带 E1 E2 B（精细结构） ?max(nm) 180 220 265 ?max 47000 7000 ~200 取代→吸收带长移，B带精细结构消失 单取代苯 助色团取代： n→?*共轭，E带、B带?↑→?