植物生物工程实验二植物DNA的提取.ppt

植物生物工程实验 植物DNA提取、质量检测 及特定基因片段操作 实验目的 了解植物DNA提取方法，熟悉操作步骤 掌握植物大分子操作注意事项及试剂用具准备方法 掌握DNA质量紫外分光光度计检测方法 了解PCR原理，熟悉操作步骤 掌握核酸的琼脂糖电泳检测方法 实验原理（DNA提取） 保证DNA一级结构的完整性 排除其它分子的污染 RNA、蛋白质、多糖等 DNA存在部位 主要存在于细胞核中，线粒体和叶绿体中也少量存在 基因组DNA的提取 CTAB法 SDS法 质粒DNA的提取 碱裂解法 煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 差速离心结合SDS裂解法 在浓氯化钠溶液(1～2mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很大,RNA核蛋白的溶解度很小;而在稀氯化钠溶液(0.14mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA核蛋白的溶解度很大.因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来. CTAB法原理 SDS法 原理 SDS 阴离子去垢剂 高温（55～65℃）裂解细胞，蛋白变性，染色体离析 高盐(KAc或NH4Ac) 或降低温度（冰浴） 使蛋白质及多糖杂质沉淀 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提 乙醇沉淀水相中的DNA 基因组DNA 新鲜材料，低温保存 细胞培养时间不能过长