微生物实验(第三节课)讲解材料.ppt

微生物学实验;微生物实验的意义、研究进展和实验内容;2. 微生物与实际应用;二、微生物学研究进展;三、微生物学与Nobel奖;四、如何进行微生物学实验;五、微生物实验安排与考核;实验一 实验室环境和人体体表微生物的检测;一、实验目的;二、实验原理;三、实验材料;四、实验步骤;四、实验步骤;四、实验步骤;四、实验步骤;五、实验报告;六、思考题;实验二 细菌形态的观察;一、实验目的;二、实验原理;三、实验材料;四、实验步骤;四、实验步骤;五、实验报告;六、思考题;本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请值日生留下值日下次课再见！; 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋电质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料．如伊红美蓝、伊红天青等。 ; 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法难于辨别细菌细胞的构造。 ; 荚膜染色法的原理是因为荚膜和染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90％以上，固染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。 ;芽胞染色法:; 细菌的鞭毛极细，直径一般为10~20nm，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色的方法很多．但其基本原理相同，即在染色前充用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上．使鞭毛直径加粗。然后再进行染色。; 革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G－)和革兰氏阴性菌(G＋)两大类，是细菌学上是常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G－菌和G＋菌。G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G＋菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 ;一、实验目的和内容 目的：巩固无菌操作技求，掌握细菌及其结 构的染色技术。 内容： 1、学习细菌单染色操作技术。 2、学习革兰氏染色技术。 3、学习细菌的荚膜、芽孢及鞭毛染色 方法。 　　;　二、实验材料和用具 1、单染色法： （1）菌种：细菌：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 放线菌： 真菌：酵母 霉菌：黑曲霉、黑根霉菌 （2）染料：吕氏美蓝染色液、齐氏石炭酸复红染色液、乳酸石碳酸棉兰、香柏油、二甲苯、无菌水 （3）显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签。 ; 2、荚膜染色： (1)菌种：褐球固氮菌 (2)硼酸钠美兰染色液、石炭酸复红染色液、黑色素液；绘图墨水 (3)载玻片、接种环、洗瓶。 (4)显微镜。 ;3、芽孢染色： (1)菌种： 培养24~36小时的枯草芽孢杆菌 (2)染料： 孔雀绿染色液、蕃红染色液 (3)载玻片、接种环、酒精灯、洗瓶、镊子、 显微镜 (4)香柏油、二甲苯、擦镜纸。 ;4、鞭毛染色： (1)菌种： 培养19-24小时的大肠杆菌 ；普通变形菌 (2)染料： 新配制的费氏及康氏鞭毛染色液A和B。 (3)无菌水、无菌空试管、凹玻片。盖玻片、洁净载玻片、接种环、洗瓶。 (4) 显微镜 ; 5、革兰氏染色： （1）菌种： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌（E.coli）菌液，待测菌菌液l~2种； （2）染料： 革兰氏染色试剂盒(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、石炭酸复红液等)、 （3）香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。;三、操作步骤 1、单染色法 （1）涂片 在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水（图4-10a），用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1～1.5cm2。 （2）干燥 将涂片于室温中自然干燥。 （3）固定 手执载片—端，使涂菌的一面向上，将