红色荧光蛋白基因在转基因唐鱼中遗传和表达的稳定性分析.PDF

第 36 卷第 7 期 水 产 学 报 Vol.36, No.7 2012 年 7 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA July, 2012 文章编号: 1000-0615(2012)07-0993-07 DOI:10.3724/SP.J.1231.2012.27815 红色荧光蛋白基因在转基因唐鱼中遗传和表达的稳定性分析 * 姜 鹏, 白俊杰, 简 清 ( 中国水产科学研究院珠江水产研究所, 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室, 广东 广州 510380) 摘要: 为了评估转红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)基因唐鱼新品系的稳定性,研究 了RFP 基因在不同世代转基因唐鱼中的遗传和表达情况。荧光显微镜下观察显示, RFP 基因 在 F6 和 F10 代所检测的组织器官中均有表达, 并且两个世代间相同组织部位的表达水平相 似。F6 和F10 代个体分别配对繁殖实验表明, RFP 基因在转基因唐鱼后代中的遗传仍然符合 孟德尔分离规律, 而且培育出的转基因个体表型特征无显著差异。利用PCR 技术在 F2 、F6 和F10 代转基因唐鱼基因组中扩增外源性肌球蛋白轻链2 启动子、RFP 基因编码区和整合位 点上下游侧翼区域( 片段总长度为4 883 bp), 测序结果显示, 3 个世代间的外源基因序列完全 相同, 没有发生碱基缺失或突变等现象。研究表明, 红色荧光蛋白基因在转基因唐鱼传代培 育过程中保持了稳定的遗传和表达。 关键词: 唐鱼; 红色荧光蛋白; 基因; 表达 中图分类号: Q 781 ；S 917.4 文献标志码: A 转基因生物成功的构建不仅要求外源基因能 唐鱼(Tanichthys albonubes Lin)又名白云金丝 够稳定地整合到受体基因组内 , 而且需要外源基 鱼 , 隶 属 于 鲤 形 目 （ Cypriniformes ）、 鲤 科 因在转基因生物及其子代中稳定地遗传和表达。然 （Cyprinidae ）、唐鱼属（Tanichthys ）, 是原产于 而, Migliaccio 等[1]在转基因 K562 细胞传代培养过 我国广州白云山附近溪流的一种小型观赏鱼类[8] 。 程中发现 , 虽然外源基因能在宿主基因组上的大 2003 年, 本实验室利用显微注射技术, 将含有斑马 多数位点完成整合和表达传代, 但是其中只有少 鱼肌球蛋白轻链 2(myosin light polypeptide 2, mylz2) 数位点可使其保持高效表达和长期稳定的遗传。另 启动子的红色荧光蛋白表达载体 (pMYL Z2-RFP) 外, Franz 等[2]在研究一种转基因埃及伊蚊品系时 注射到唐鱼受精卵中, 开发出一种体色红艳更具 发现, 当外源基因传至 F14 代时, 外源基因 mRNA 观赏价值的转基因唐鱼新品系[9] 。对此品系的研究 表达量开始下降, 并在 F17 代时完全停止表达; 同 发现, RFP 基因是以单位点三拷贝首尾串联的形式 时, 多数研究报告已显示, 转基因启动子区甲基化 整合到唐鱼基因组中[10-11], 而且 RFP 基因的遗传 是引起外源基因表达水平下降甚至失活沉默的关 符合孟德尔分离定律, 不存在沉默整合个体[12] 。如 键因素[3-4] 。除了上述的位置效应和 DNA 甲基化以 今, 转基因唐鱼品系已培育至第