流式细胞术应用讲解概述.ppt

流式细胞术应用概述;流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用 免疫学检测和科研应用 肿瘤学检测和科研应用 凋亡分析 血液学检测和科研应用 其它应用 ; 流式细胞术的一般介绍;什么是流式细胞术？;流式细胞仪特点;FACSCalibur;流式细胞仪可检测的细胞参数;流式细胞仪分析数据常见图形：（二维）点阵图 (Dot Plot);流式细胞仪分析图谱; 特征信息－荧光（Fluorescence）信号;设门：选择要分析的细胞群体;流式细胞术在临床检测和科研中的应用;1、细胞表面分子标记（以淋巴细胞亚群检测为例）;原理; T淋巴细胞;淋巴细胞亚群及功能;CD4+CD25+CD127-Treg检测;活化T淋巴细胞;淋巴细胞亚群与疾病;淋巴细胞亚群检测意义;淋巴细胞亚群检测意义;2、胞内分子流式细胞术检测（以Th1/Th2细胞因子检测为例）;Th1/Th2细胞;Th1/Th2细胞;Th1/Th2细胞;流式细胞术检测胞内细胞因子 ;Th1/Th2失衡相关疾病;Th1/Th2细胞检测意义;二、流式细胞术在肿瘤学中的应用;1、DNA倍体和细胞周期分析;细胞周期和DNA倍体分析的原理;细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（％），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量 ;Diploid: 64.50 % Dip G1: 92.45 % at 49.24 Dip G2: 2.30 % at 98.48 Dip S: 5.26 % G2/G1: 2.00 %CV: 3.21 Aneuploid 1: 35.50 % An1 G1: 97.69 % at 58.53 An1 G2: 0.00 % at 123.89 An1 S: 2.31 % G2/G1: 2.12 %CV: 3.14 DI: 1.19;可检测标本;意义;2、肿瘤相关基因编码蛋白检测;P53;Bcl-2;nm23;CD44(CD44s/CD44v);3、 Cyclin(细胞周期蛋白)检测;P-gp在肿瘤组织中的表达;4、凋亡检测;三、流式细胞术分析凋亡; 细胞凋亡与疾病的关系—— 该“死”的细胞不死，不该“死”的细胞却死了，也就是说无论凋亡过度或凋亡不足都可以导致疾病的发生。 细胞凋亡不足：肿瘤，自身免疫病 细胞凋亡过度：心肌缺血，心力衰竭，神经元 退行性疾病，病毒感染 不足与过度并存：动脉粥样硬化;细胞凋亡过程 ;凋亡的检测方法;1.磷脂酰丝氨酸外翻分析(ANNEXIN V标记法);结果分析;结果分析-优;结果分析-差;如何获得好的结果;2.??粒体膜势能的检测 ;结果分析;3.DNA片断化检测;4.TUNEL法;结果分析;结果分析;5.Caspase-3活性的检测 ;四、流式细胞术在血液学中的应用;1、流式细胞术白血病免疫分型;;急淋 （ALL）;MIC分型以形态学为基础、免疫学和细胞遗传学作补充，相互结合，使分型更趋精确。其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。;利用荧光素标记的单克隆抗体鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志，可准确反映白血病细胞的所属系列（T\B\髓）及分化程度。 检测分析时，首先根据CD45表达强弱和细胞颗粒度，在CD45-SSC图中确定幼稚或异常的细胞群体。然后分析检测各种标志的表达情况及其阳性率。;流式细胞术白血病免疫分型优点;;CD4、CD8、CD61、CD56、CD38;标本来源;样本保存;保存时间;正常骨髓流式分析图;根据骨髓细胞CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞 R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞通常会在R4 R6 两门位置处出现 ;举例;M3: CD13和/或CD33阳性，CD15阳性，CD34、HLA-DR、CD14阴性，偶尔表达CD2。MPO阳性。;混合表型;目前急性白血病的分类仍较复杂，流式细胞术免疫分型能提高分型的准确性，但不是疾病的诊断。 理想分类法应该以形态学为基础，结合免疫学和细胞遗传学、分子生物学提供信息。 国际血液学家及血液病理学家2001年3月里昂会议上的造血和淋巴组织肿瘤的WHO分类法，应用MICM分类技术力求反映疾病本质，成为国际上一种新的分类标准。;2、流式细胞术多发性骨髓瘤免疫检测;;3、网织红细胞血小板检测;4、血小板自身抗体检测; 血小板活化实验;6、夜间阵发性血红蛋白尿;7、造血干细胞检测;CD34