《HSCCC分离体系的筛选与影响因子》.ppt

主要参数 影响HSCCC体系的分离效果的主要参数K 待分离样品的不同成分在上下相中的溶解度的分配比 K ＝ Cs/Cm 理想的分配比值 k = 0.67~1.5 测定方法 如何测定K值？ ▲ 利用分光光度计 ▲ 利用TLC ▲ 利用HPLC ▲ 利用生物活性分配比率法 ◆ 固定相保留率 ◆ 转速及流速 ◆ 温度 ◆ pH值 ◆ 进样量 当体系选定后，在适当合理的调节这些因素，样品可以达到有效的分离。 选择方法 一、经典体系 二、参考文献 三、自选体系 四、体系的调节 五、常见体系组合 文献： 银杏黄酮类有效成分的分离 溶剂系统:氯仿-甲醇-水 (4:3:2) 流速:2ml/min 转速:900rpm 分离温度:26?C * 高速逆流色谱仪的应用 — —体系的筛选及其影响因素 TOPICS: HSCCC概念 体系筛选的主要参数 K值的测定方法 分离的影响因素 体系的选择方法 具体实例 小结 高速逆流色谱（HSCCC）是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两项不断混合，同时保留其中的一相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，在固定相中分配比例大的后被洗脱。 与传统色谱相比，它是液液分配的，动态的，多维力场的分离方法。 HSCCC Cs Cm 两种溶质分离因子： α＝ K1/K2 分离的影响因素 ◆ 固定相保留率 直接决定分离柱的有效长度，合适的范围为30％～80％。在一定范围内，保留率越高，分离越好。 ◆ 转速及流速 不同的机型可选择不同的转速及流速。在一定范围内，转速提高，保留增加；流速降低，保留增加。 ◆ 温度 不同的样品及不同的体系，温度的影响可能都会不一样。可配置恒温装置，控制实验因素。 ◆ pH值 可通过调节体系的PH值使样品的溶解度达到合适的范围。 ◆ 进样量 进样量的大小及溶样体积多少的影响 一、经典体系 正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1） 正己烷－甲醇－水（1－1－1） 氯仿－甲醇－水（4－3－2） A C B 二、参考文献 参考与目标成分相类似的成分的分离，确定初分体系的组分及比例。 文献： 葛根素 (黄酮苷) 乙酸乙酯－正丁醇－水（2－1－3） 小檗碱 (生物碱) 氯仿－甲醇－0.1mol/LHCl（2－1－1） 紫杉醇 (萜类) 正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1） 三、自选体系 在选择之前，清楚了解目标成分的性质。目标成分的性质对体系的选择很重要，如它的溶解度、极性、分子结构等。 蒽醌类 易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇 苷类 易溶于正丁醇、乙醇、甲醇、水 在研究的任一阶段都可进行自选体系的摸索。 重点是：体系组成和各组分比例。 根据样品在各种溶剂中的溶解性来确定组分，然后通过测K值观察样品在上下相中的溶解度变化来确定比例。 例如： 挥发油类 性质：易溶于石油醚、正己烷，溶于甲醇、乙醇，不溶于水 组分可选择： 石油醚－甲醇－水 石油醚－乙酸乙酯－甲醇－水 组分比例可通过测K值，确定比例是1－1－1或4－3－1，从而初步筛选出体系 四、体系的调节 1、两个方向 （一） 增加（或减少）目标成分在固定相中的溶解度 （二） 减少（或增加）目标成分在流动相中的溶解度 2、具体调整方法 （一）微调体系比例 如：氯仿－甲醇－水（4－3－2） 微调比例：3.5－3－2或4－3－1.5 （二）增加（或减少）某一组分