Western Blot-共聚焦.pptVIP

结核性腹膜炎的诊断现状课件浅表淋巴结诊断对有出境竹木草制品生产企业质量管理体系要求课件输液反应的相关处置课件 严 明 2013-8-26 口腔颌面肿瘤实验室 实验技术培训 第六章 免疫印迹实验技术 激光共聚焦技术 实验目的 检测细胞或组织蛋白中目标蛋白质的表达 表达定位：组织（细胞）免疫荧光 激光共聚焦 表达定量：western blot Western blot技术 原理 免疫印迹（Western blotting ） 应用蛋白质特异的单克隆抗体或多克隆抗体检测特异性的目的蛋白 未知蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶单向电泳（SDS） 转移到固相支持物 特异性的抗体检测目的蛋白 原理 SDS多肽 SDS-多肽 多肽 DTT 断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构 SDS： 阴离子表面活性剂（去污剂），断开分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构 蛋白质 迁移率只与多肽的分子量大小有关 原理 适用范围和条件 检测细胞或组织内目的蛋白质的表达 检测细菌、真菌、血清等目的蛋白的表达 非原位检测，不能对目的蛋白做细胞定位 必须有目的蛋白质的特异性抗