细胞生物学实验-鸡血细胞的体外融合.pdfVIP

鸡血细胞的体外融合 鸡血细胞的体外融合 实验目的： 1. 了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。 2. 通过PEG诱导鸡血细胞融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。 实验原理： 细胞融合是在自发或人工诱导（诱导剂或促融剂）下，两个或两个以上 的异源（种、属间）细胞或原生质体相互接触，发生膜融合、胞质融合和核 融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合。基本过程包括细胞融合形成异核 体（heterokaryon）、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核 杂种细胞。 有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合，即由两个配子融合形成 一个新的的二倍体。体细胞融合可形成四倍体或多倍体细胞，最终形成杂种 细胞的特性会有很大变化。 鸡血细胞的体外融合 细胞融合的历史： 科学家很早就注意到了在自然条件下发生的细胞融合现象，最初是在病 理组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞，紧接着发现在脊椎动物和无脊 椎动物的正常细胞中也有融合的细胞，随后在体外组织培养中也发现了离体 细胞的融合现象。活病毒可在体内介导癌细胞融合的发现帮助科学家实现了 利用灭活病毒促进动物异种细胞的融合，从而打破了细胞融合的种属屏障， 推动细胞融合技术跃上新的台阶。由于原生质体的大量制备较为困难，限制 了植物细胞融合技术的发展，因此植物细胞融合的起步较动物细胞融合要迟 10年左右。直到用酶法大量制备有活力的原生质体获得成功后，才使植物原 生质体的融合工作迅速发展起来。细胞融合的方法和手段始终朝操作方便、 简单，便于量化研究，同时融合率又能得到不断提高的方向发展。 鸡血细胞的体外融合 应用领域（动物细胞）： 1. 用于基因定位和绘制人类基因图谱：根据杂种细胞中某一染色体或其片段的存 在与否和细胞的某一性状表达与否相联系 ，从而可以实现把基因定位于某一染 色体或某一区段上。 2. 用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗：一般认 为肿瘤细胞表面抗原不能诱导强的免 疫应答反应，但是树突状细胞（Dendritic Cells, DCs）与肿瘤细胞融合形成的树 突状细胞疫苗能够有效地激发机体的细胞免疫应答，已经在动物研究和人体早 期临床试验中证明这是一种方便、安全、可行的方法。 3. 用于生产单克隆抗体：使小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成能产生单克隆抗体 （monoclonal antibody, mAb）的杂交瘤细胞，单克隆抗体具有专一性和灵敏性， 是重要的生命科学研究工具。 4. 用于动物育种：体细胞核移植技术（Somatic Cell Nuclear Transfer Technique, SCNT）是将细胞核移植到另一细胞的细胞质中 的生物技术。动物体细胞融合后， 杂种细胞难以发育再生为一个个体，但借助于细胞核移植的方法将融合后杂种 细胞的细胞核移入去核成熟卵内，可培育新的杂种动物体。 5. 在基础理论研究方面：用于研究细胞的核质关系和个体发育；用于揭示疾病发 生的机制；用于膜蛋白动力学研究等。 鸡血细胞的体外融合 应用领域（植物细胞）： 植物细胞融合技术目前主要是作为扩大变异的手段，同时也正朝着将抗 药性和胞质雄性不育等细胞质基因导入另一个体细胞的方向发展，有可能形 成新的核质杂种。如果获得了有用性状的细胞系，在还不能形成植株时，就 可以通过快速大量繁殖细胞加以利用。 在生产应用研究方面，植物细胞融合在育种上有重要的应用价值，通过 诱导不同种间、属间甚至不同科间原生质体的融合，有可能打破有性杂交不 亲和的界限，广泛地组合各种基因型，从而形成有性杂交方法所无法获得的 新型杂种植株；另一方面可将各种细胞器、DNA、质粒、病毒、细菌等外 源遗传物质引入原生质体，从而引起细胞遗传性的改变，为某些珍稀植物的 快速繁殖、植物的复壮等提供了可行的方法，可以应用于植物育种、种质保 存、无性系的快速繁殖和有用物质生产等。 植物细胞融合配合常规育种技术，可望选出优良材料，加之体细胞杂交 来自双亲的遗传物质并非简单的堆积，而是发生了复杂的遗传重组，这正是 改良作物所期望的。植物细胞融合的作用主要表现在：通过植物细胞融合培 育抗病新材料；合成新的物种；转移细胞质基因。 鸡血细胞的体外