酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究.pdfVIP

国外医学临床生物化学与检验学分册 2002年第23卷第4期 233 绘二述 ·I古床 么夕.予 生 物 学 · 酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究 刘北忠综述 蒋纪恺 康格非 审校 (重庆医科大学检验系临床生化教研室，重庆400016) 摘 要:酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法，主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白 相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中，通过酵母双杂交系统 能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。 关键词:酵母双杂交系统;细胞信号转导;蛋白质相互作用 中图分类号:Q32 文献标识码 :A 文章编号:1006-3730(2002)04-0233-03 随着人类基因组计划的迅猛发展，人们不再满足于获得一 知靶RNA系统鉴定新的RNA结合蛋白，或通过已知蛋白筛 部天书，解读天书、解码生命已成为当务之急。为适应同时对 选与之特异结合的RNA, 多个墓因或蛋白进行研究的需要，DNA芯片技术、蛋白质芯片 1.2 单杂交系统(one-hybridsystem)与细胞信号转导研究 技术、蛋白双向凝胶电泳、基因表达系列分析、肤质谱分析等新 许多细胞信号最终要导入核内，引起相关基因的表达改变，这 技术不断涌现，其中酵母双杂交系统的应用 日益广泛。 就需要研究蛋白与DNA的相互作用。在此，单杂交系统是一 项有效的技术[[3]。它是将要研究的DNA序列置于报告基因 1 酵母双杂交系统的发展及其在信号转导研究中的 的上游，以这段特异性的DNA序列作为诱饵，去筛选 。DNA 应用 文库编码的靶蛋白。单杂交系统将在基因调控等功能研究中 酵母双杂交系统自1989年建立以来，短短12年的时间， 发挥积极的作用。 其应用十分广泛，成果也十分丰富，尤其在细胞信号转导研究 1.3 反向双杂交系统(reversetwo-hybridsystem)与信号转导 中具有重要的应用价值。 研究 在确定了蛋白质之间的相互作用后，进一步研究其结构 在细胞的信号转导中，物质与物质的相互作用是一种主要 与功能的关系及其调节显得十分必要。这不仅有利于鉴定那 的信号传递形式。专门研究物质间(蛋白与蛋白、蛋白与核酸、 些阻碍蛋白相互作用的突变结构或突变单位，对筛选特异性蛋 蛋白与小分子配体等)相互作用的酵母双杂交系统正好符合信 白相互作用的阻断剂也是十分有效的，必将增加人们对细胞内 号转导的研究需要，对细胞的信号转导研究起重要的促进作 信号转导过程的人为控制能力。 用。 1996年，Vidal等建立了反向双杂交系统[4]，按照反选择 但在实际应用过程中，传统的酵母双杂交系统有不少的局 策略，一类方法是设计一种能直接或间接地导致细胞毒性或死 限性，人们根据不同的需要对传统的酵母双杂交系统进行不改 亡的报告基因，正常的蛋白相互作用后引发细胞死亡，而蛋白 造，发展了多种新的技术。 与蛋白结合区的突变或其他外界因素若干预蛋白间的相互作 1.1 三杂交系统(three-hybridsystem)与细胞信号转导研究 用时，报告基因就不表达，细胞得以存活 按此类设计，Vidal 蛋白质与蛋白质除了直接相互作用外，在许多细胞内的信号传 等引入URA3基因作为报告基因，该基因编码的酶能将培养 递过程中往往需要另外的分子参与，包括联结蛋白、多肤、激 基中加入的5-氟乳清酸转变为5-氟脉普,5-氟脉普进一步变为 酶,RNA和一些小分子有机配体。这第三个分子可通过稳定 5-氟脱氧脉普，它竞争性地抑制胸普的合成，从而阻碍DNA合 诱饵蛋白与靶蛋白的相互作用，或作为桥梁介导两者的相互作 成，引起细胞死亡。在含a-氨基乙酸盐的培养基中L