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基因重组与基因工程(genetic recombination and genetic engineering);相关概念 基因（Gene）：是一段编码蛋白质多肽链和功能RNA的DNA(DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列)。 基因组(genome)：一个细胞或生物体所携带的全部遗传信息或整套基因。;基因重组 是指在体外用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA分子的过程，又称DNA重组。; 基因克隆 将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的同一DNA分子，称此为基因克隆、DNA克隆或分子克隆。 基因工程 实现基因克隆所采用的方法和相关工作，统称为重组DNA技术或基因工程。;1946年，美国生物化学家E·L·塔特姆和美国遗传学家J·莱德伯格发现两种细菌在混合培养时发生了“杂交”，在世界上首次实现了基因重组。他们因此荣获了1958年诺贝尔生理学奖。 ; 主要内容 重要的工具酶 基因克隆常用的载体 重组DNA基本原理 重组技术的应用;一、 重要的工具酶;（一）、限制性核酸内切酶(RE) 是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键 的核酸内切酶，简称限制酶或切割酶。 根据限制酶的作用特性，一般分为三类： ——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型， 其中常用的是Ⅱ型限制酶。 ;限制性内切酶能够在DNA上寻找特定的“切点”，认准后将DNA分子的双链交错地切断。因此，限制性内切酶被称为“分子剪刀”，它可以完整地切下个别基因。 自70年代以来，人们已经分离提取了400多种“分子剪刀”。有了形形色色的“分子剪刀”，人们就可以随心所 欲地为DNA分子做手术了。 ; 常用限制性核酸内切酶的特性;（二）、DNA连接酶(DNA ligase) ; DNA连接酶可以催化带有粘性末端或平头末端的双链DNA中一条链的3ˊ－OH与另一条链的5ˊ－PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的DNA长链。 DNA连接酶的用途 （1） 两个双链DNA片段连接起来 5ˊ- ACG AATTCGT-3ˊ T4DNA连接酶 5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊ 3ˊ- TGCTTAA GCA-5ˊ 3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ （2） 修补带有???口的双链DNA分子;美国生物化学家、现代基因工程的创始人P·伯格在1972年把两种病毒的DNA用同一种限制性内切酶切割后，再用DNA连接酶把这两种DNA分子连接起来，于是产生了一种新的重组DNA分子，首次实现两种不同生物的DNA体外连接，获得了第一批重组DNA分子，这标志着基因工程技术的诞生。伯格因此获得了1980年诺贝尔化学奖。 ; （最常用的DNA聚合酶有以下4种） DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅰ大片段——Klenow片段 Taq DNA聚合酶 T4 噬菌体DNA聚合酶 ;Taq DNA pol（耐热DNA聚合酶）;　 如果找到一种办法操纵分子复制技术这个环节的话，那么目标DNA不就可以以指数形式扩增了吗 PCR法被称为是“DNA分子的拷贝机”。 ;PCR是聚合酶链反应（polymerase chain reaction）的简称，是一种在短时间内使DNA大量扩增的技术。 在模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等条件下，体外经94℃变性、54℃退火及72℃延伸3个步骤的反复多次循环（25?30次），扩增目的基因。;（四）、逆转录酶; 逆转录酶的应用： ⑴ 将mRNA逆转录成cDNA，构建cDNA文库； ⑵ 补平和标记5ˊ-末端突出的DNA片段； ⑶ 代替Klenow酶用于DNA序列分析； ⑷ 制备杂交探针等。;（五）、碱性磷酸酶 ;（六）、末端 （脱氧核苷酸）转移酶(TdT) ;二、基因克隆常用的载体;（一）、载体必须具备的基本条件;（二）、载体的种类*;（三）、常用的载体 ;质粒载体应该是一种分子量较小、高拷贝的“松弛型”质粒，且具有一个以上遗传标志和多克隆位点的质粒。 广泛应用的质粒： pBR32质粒、pUC系列等; pBR322质粒;1973年，斯坦福大学教授S·科恩和加利福尼亚大学教授H·W·博耶将两个不同的质粒（一个是抗四环素质粒，另一个是抗链霉素质粒）拼接在一起，组成嵌