第九章 白细胞检验方法_温医《临床血液学检验》课件.doc

第九章 白细胞检验方法 第一节 白细胞功能检验 一、 墨汁吞噬试验 【原理】 血液中中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用。在一定量的肝素抗凝血中，加入一定量的墨汁，经 37℃温育 4 小时，涂片染色镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况，并计算吞噬率及吞噬指数。 【参考值】 成熟中性粒细胞吞噬率 74±15，吞噬指数 126±60；成熟单核细胞吞噬率 95±5，吞噬指数 313±86。 【临床评价】 粒细胞的吞噬功能仅限于成熟阶段，单核细胞幼稚型和成熟型都具有吞噬能力。 M5b 急性单核细胞白血病 M5a 为弱阳性， 吞噬指数明显增高。急性粒细胞（M2）、急性淋巴细胞和急性早幼粒细胞白血病的原始及幼稚细胞多无吞噬能力，吞噬试验为阴性。急性粒-单核细胞白血病呈阳性反应，对鉴别有一定价值。慢性粒细胞白血病的成熟中性粒细胞吞噬能力明显减低。 二、白细胞吞噬功能试验 【原理】 分离白细胞悬液，将待测的吞噬细胞与某种可被吞噬而又易于查见计数的颗粒物质如葡萄球菌混合，温育一定时间后，细菌可被中性粒细胞吞噬，可在镜下观察中性粒细胞吞噬细菌的情况，根据吞噬率和吞噬指数即可反映吞噬细胞的吞噬功能。 【参考值】 吞噬细菌的细胞数 1. 吞噬率（％）＝ 100 ； 正常人为 62.8±1.4。 200个（中性粒细胞） 200个中性粒细胞吞噬细胞 总数 2. 吞噬指数＝ 200个（中性粒细胞） ； 正常人为 1.06±0.05。 【临床评价】 吞噬细胞分大吞噬细胞和吞噬细胞两大类。前者包括组织中的巨噬细胞和血循环中的大单核细胞，后者主要是中性粒细胞。本试验可了解中性粒细胞的吞噬功能。如吞噬率和吞噬指数增高，反映中性粒细胞吞噬异物功能的增强，常见于细菌性感染。对疑有中性粒细胞吞噬功能低下者，有帮助确诊的价值。 三、血清溶菌酶活性试验 【原理】 溶菌酶能水解革兰氏阳性球菌的细胞壁乙酰氨基多糖成分，使细胞失去细胞壁而破裂。以对溶菌酶较敏感的微球菌悬液为作用底物，根据微球菌的溶解程度来检测血清或尿中溶菌酶的活性。 【参考值】 血清5～15mg/L ，尿0～2mg/L。（比浊法） 【临床评价】 在人体血清中的溶菌酶，主要来自血中的单核细胞和粒细胞，其中以单核细胞含量最多。在中性??细胞中，从中幼粒到成熟粒细胞可随细胞的成熟程度而增高。嗜酸性粒细胞，除中幼阶段外，均无此酶活性。淋巴细胞中则含量极低。血清和血浆中的溶菌酶大部分是由破碎的白细胞所释放。 1.血清溶菌酶含量增高 可见于部分急性髓细胞白血病①急性单核细胞白血病的血清溶菌酶含量明显增高，由于成熟单核细胞溶菌酶的含量很多，因而在周围血中成熟单核细胞的多少，直接影响血清溶菌酶的测定值。一般认为急单血清溶菌酶增高，是由于患者的单核细胞不能转移到组织内或溶菌酶迅速从单核细胞释放入血的结果。尿溶菌酶含量也增高，故尿溶菌酶阴性可排除急单的诊断。②急性粒-单核细胞白血病血清溶菌酶含量也有明显增高，其增高程度与白细胞总数有关。在治疗前其含量明显高，表示细胞分化程度较好，预后亦较好。③急性粒细胞白血病的血清溶菌酶的含量可正常或增高，临床意义与急粒-单核细胞白血病相似。急性粒细胞白血病和急性单核细胞白血病都是在治疗缓解，白细胞减少时，其含量也同时下降，但在复发时上升。 2.血清溶菌酶含量减低 急性淋巴细胞白血病多数减低，少数正常。慢性粒细胞白血病血清溶菌酶含量正常，但急变时下降。 四、硝基蓝四氮唑还原试验 【原理】 硝基蓝四氮唑（Nitroblue Tetrazolium，NBT）是一种染料，其水溶性呈淡黄色。当被吞入或渗入中性白细胞后，有产生过氧化物酶的作用，可接受葡萄糖中间代谢产物葡萄糖-6-磷酸在已糖磷酸旁路代谢中 NADPH 氧化脱下的氢，而被还原成非水溶性的蓝黑色甲月替 颗粒，呈点状或片状沉着在胞浆内有酶活性的部位，可在显微镜下观察并计数阳性细胞百分比。 【参考值】 正常成人的阳性细胞数在 10以下。若有 10以上中性粒细胞能还原 NBT，即为 NBT 还原试验阳性；低于 10则为跣浴?【临床评价】 1.用于中性粒细胞吞噬杀菌功能异常的过筛鉴别和辅助诊断儿童慢性肉芽肿（CGD），葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏症，髓过氧化物酶缺乏症和 Job氏综合症，NBT 还原试验阳性。如在涂片中能查出几个出现甲月替 沉淀的中性粒细胞即可排除 CGD。故本试验可用于这些疾病的过筛鉴别和辅助诊断。如在涂片中未查出有甲月替 沉淀的中性粒细胞而又不能确定是 CGD 时，可作细菌内毒素激发试验确诊之。 将 取 方法如下： 10g 大肠杆菌内毒素溶于 50ml 生理盐水， 0.05ml与 0.5ml 肝素抗凝血（12.5 单位肝素/ml 血）在试管内混匀，盖住管口置室温15min 后，按前述方法进行 NBT 还原试验。若 N