复旦大学《生物制药技术》教学-发酵工程制药.docVIP

发酵工程制药 一、概述 发酵（fermentation）：用生物催化剂（Biocatalyst)使培养物质转变成产品的生物化学反应。 发酵工程的特点 1、众多反应在发酵设备中一次完成。 2、反应条件温和，设备简单。 3、微生物需为纯种状态 4、培养基和设备预先灭菌。 5、发酵过程保持无杂菌污染。 6、有生长期和生产期两个不同阶段。 7、易产生复杂的高分子化合物。 8、理论产量很难从物料平衡计算。 9、产生结构类似的组分或副产物，需提取、 分离、精制等。 二、发酵工程微生物 菌种分离的一般过程（来源）：土样的采取--预处理--培养--菌落的选择--产品的鉴定 理想发酵用菌种的要求 1、遗传性状稳定； 2、生长速度快，不易污染。 3、目标产物产量尽可能接近理论转化率。 4、目标产物最好分泌到胞外。 5、尽可能减少类似物的产量 6、培养基成分简单，来源广，价格廉。 7、对温度、pH、离子强度等环境因素不敏感。 8、对溶氧的要求低，便于培养及降低耗能。 微生物的营养物质 1、碳源（Carbon source） 定义：凡可被用来构成细胞物质或代谢产物中碳素来源的营养物质。 功能：提供合成细胞物质及代谢物的原料;并为整个生理活动提供所需要能源（异养微生物）。 种类：无机含碳化合物、有机含碳化合物 常用碳源：葡萄糖（速效、引起葡萄糖效应）、糖蜜、淀粉糊精（迟效，解除葡萄糖效应，微生物需分泌能水解淀粉、糊精的酶类） 2、氮源 定义：用于构成菌体细胞物质（氨基酸，蛋白质、核酸等）和含氮代谢物的营养物质。 分类： a.有机氮源——廉价原料 速效氮源：以蛋白质降解产物形式存在的有机氮源，可以直接被菌体吸收利用。如：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。可同时提供无机盐及生长因子 迟效氮源：氮以大分子蛋白质的形式存在，需降解成小分子肽和氨基酸后才能被利用，如豆饼、葵花饼、花生饼等。 b.无机氮源 ：速效氮源，但迅速利用常会引起pH的变化。 **有机氮源与无机氮源混合使用，早期用无机氮源（速效），中期起用迟效氮源（如蛋白质） 3、微量元素（无机盐） 来源：C、N源或以盐的形式补充 生理功能： ·构成微生物细胞的组成成分; ·调解微生物细胞的渗透压， pH值和氧化还原电位; ·有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源 ; ·构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂。 4、生长因子、前体、产物促进剂 生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物质，多数来源于有机氮源 前体：某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中合成到产物分子中，产量有较大的提高。 5、水 培养基 定义：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长 繁殖所需的一组营养物质和原料。 原则： （一）培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确） （二）营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） C/N=100:0.5~2 （三）物理化学条件适宜（条件适宜） （四）根据培养目的选择原料及其来源（经济节约） 三、种子的培养※※ 种子的扩大培养：将保存在砂土管、冷冻干燥管等保藏方法中处于休眠状态的菌种，接入斜面活化后，经扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。 种子扩培的目的: 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 移入种子的体积 接种量＝ ——————————————— 过大过小都不好，但一般认为大一点好 接种后培养液的体积 种龄：种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 种子的质量要求: 1、总量及浓度能满足要求 2、生理状况稳定（个体与群体） 3、无杂菌污染 4、菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短 作为种子应具备的条件 1、菌种细胞的生长活力强，转种至发酵罐后能迅速生长，延迟期短 2、生理状态稳定 3、菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求 4、无杂菌污染，保证纯种培养 5、保持稳定的生产能力 种子的质量标准 1、菌丝形态、菌体浓度和培养基外观（色素、颗粒等） 2、PH 3、糖氮代谢速度 4、其他参数，如接种前的抗生素含量、某种酶活度等 影响种子质量的因素： 1、原材料的质量： 选择有利于孢子发芽和菌丝生长的培养基， 且培养基营养成分尽可能和发酵培养基接近以适合发酵的需要 2、培养温度：过低？过高？ 3、湿度：湿度低，孢子生长快；湿度大，孢子生长慢。 4、通气与搅拌：通气搅拌不足可引起菌丝结团，菌丝黏壁等异常现象 5、斜面冷藏时间：冷藏时间对孢子的生产能力有影响 种子质量的控制措施：