复旦大学《生物制药技术》教学-基因工程.pdf

基因工程制药 史训龙 讲师 xunlongshi@fudan.edu.cn 背景 化学药物 药物 天然药物 生物技术药物 基因工程—生物技术药物 基因工程—化学药物 克隆 DOCPC编 顶头孢菌 码基因 cefEF 青霉素N 脱乙酰氧基头孢 菌素C （DOCPC) 合成 DOCPC CPC 重组菌： CPC产量提高25% 青霉素N积累1/15 cefEF基因剂量，DOCPC合成酶表达量提 高1倍。 基因工程—天然药物 人参皂苷类化合物—Rd ，CK 黄芪甲苷 。。。。。 基因工程技术制备药物的优势  制备很珍贵但利用传统方法难以制备的药  可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和 结构进行深入研究，  可以发现和挖掘更多的内源生理活性物质。  内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通 过基因工程和蛋白工程进行改造和克服。  利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 概述 一、基本概念 DNA重组 （in vitro DNA recombination technology ） 基因克隆 （gene cloning） 或分子克隆 （molecular cloning）技术。 基因工程 （gene engineering） 基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为 理论基础， 以分子生物学和微生物学的现代方法为手段， 将 不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图， 在体外构建 杂种DNA分子， 然后导入活细胞， 以改变生物原有的遗传特 性、获得新品种、 生产新产品。 二、基因工程产生的基础 1 理论上三大发现 40年代发现了生物的遗传物质-DNA 50年代阐明了生物遗传物质的分子机制， Watson and Crick提出了DNA双螺旋结构 模型。 60年代确定了遗传信息的传递方式-中心 法则 2 技术上三大发明 限制性内切酶和连接酶的发现 载体（Vector）的发现：载体相当于运送重组 DNA分子到宿主细胞的车子 逆转录酶的发现，打破了中心法则，使真核基 因的制备成为可能 一、重组DNA技术的基本过程  基因工程要素  目的基因的制备和分离 DNA重组体的构建 DNA重组体扩增和表达  重组体筛选和鉴定  外源基因的表达  表达产物的分离纯化、鉴定 目的基因 酶切 载体 重组体 扩增、抽提和鉴定 导入受体细胞 大量生产 表达产物的分离鉴定 表达 基因工程的基本流程 二、基因工程的分类 真核基因工程 原核基因工程 三、重组DNA技术-基因工程与医学的关系 重组DNA技术-基因工程与医学的关系 1.研究基因的结构功能和活动的规律。 2.为疾病的防治、诊断、预后及发病机理的研究 开辟新途径。 3.研究细胞分化和胚胎发育的本质问题。 4.基因治疗。 5.促进基础理论的研究。 第三节 基因工程的酶和载体