第14讲 植物胚胎培养.pptVIP

第14讲　植物胚胎培养 主要内容： 第一节 胚培养 第二节 胚乳培养 第三节 胚珠和子房培养 第四节 离体受精 学习目标与要求： 了解植物胚培养类型、过程、培养条件，以及胚培养的应用。了解植物胚乳培养过程和培养条件，了解胚乳培养在实践中的应用。认识植物胚珠和子房培养方法及其在生产上应用。 具备胚胎培养基本认知，有进行各类胚胎培养的基本能力。 植物胚胎培养（Embryo Culture）概念: 指对植物的胚、胚乳、胚珠和子房进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括胚培养(embryo culture)（成熟胚培养、幼胚培养）、胚珠培养(ovule culture)、子房培养(ovary culture)、胚乳培养(endosperm culture) 等类型。 1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根菜的胚。 胚胎培养的类型 植物胚胎培养 一、胚培养 胚培养：指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行培养的技术。 胚的发育过程包括从合子分裂到幼胚形成直至发育为成熟胚的过程。 植物胚胎发生过程： 原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚 1. 胚培养的意义 促使发育不良或中途败育的胚发育成熟 缩短育种周期 获得单倍体植株 打破休眠期促进胚萌发 建立高频再生体系 可作为转基因受体材料 2. 胚培养技术 胚的发育对营养的要求有2个阶段，即： 异养期：这一时期的幼小胚完全依赖胚乳和周围的母体组织提供营养。 自养期：这一时期胚能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代谢作用合成其生长必需的物质，在营养上已可以完全独立。 2. 胚培养技术 依据所剥离胚的发育时期不同： 幼胚培养：是指处于原胚期、球形期、心形期、鱼雷期的胚培养；幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。 幼胚培养的基本程序 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 幼胚培养 幼胚离体培养的生长发育方式： 胚性发育：幼胚在体积上增大甚至超过正常胚大小，按照在活体内的发育方式生长发育形成完整植株。 早熟萌发：幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。多数情况一个幼胚萌发成一个植株，有时因细胞分裂形成许多胚状体，进而形成许多植株，即丛生胚现象。 愈伤组织：多数植物幼胚形成愈伤组织。再分化成胚状体或形成芽苗。 成熟胚培养：指子叶期至发育成熟的胚培养。成熟胚是自养的，培养基需要简单。仅提供一定的温度、湿度就可以发芽生成植物体。如种子的发育。 培养过程： 选取完好种子——70%酒精浸数秒——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡 ——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。 胚龄与胚性发育的关系 胚龄越小，离体培养越困难； 胚的发育分为自养期和异养期，双子叶植物球形胚之前属于异养，心形胚以后转入自营养； 影响胚培养成功的因素 培养基：无机盐、碳水化合物、激素等 环境条件(温度：多数为25-30℃，因植物种类有所差别。光照：一般认为黑暗或弱光条件较为合适。) 胚龄及接种时期:自养期较异养期容易获得成功。 相关参考文献 红豆杉属植物的种子成熟后,有一段很长的休眠期,在自然状态下种子需要几年才能萌发,且种子萌发率、出苗率很低,是造林、引种、繁殖和育种的重要障碍.离体胚培养能够在一定程度上破除种子的休眠,缩短萌发期,提高萌发率和成苗率. 二、胚乳培养 胚乳培养（Endosperm culture）：是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养技术，使其发育成完整植株的技术。 被子植物胚乳是由2个单倍的极核和1个单倍的精子结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。 裸子植物很特殊，它的胚乳在受精前就已形成。裸子植物的胚乳为配子体的一部分，由大孢子直接分裂发育而成，因此是单倍体组织。 1.胚乳离体培养的意义 胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。 2.胚乳培养技术 胚乳培养过程 含胚乳的果实或种子→表面消毒→无菌条件下胚乳的剥离→接种培养基培养。 培养室温度25-27℃，黑暗或弱光下。 影响植物胚乳培养的主要因素 胚乳是一种独特的组织，在被子植物中它是双受精的产物，在倍性上属于三倍体，事实上我们培养胚乳的首要目的也是为了直接获得三倍体植株。 基因型 胚乳的