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3 5gyx射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制的研究 word格式
和P21WAF1(约257倍)mRNA表达量明显升高。以上结果显示放射后72h细胞大量衰老。在衰老细胞中Wnt3a(约12倍)mRNA的表达略升高,Wnt5a(约150倍) 的mRNA 表达明显升高。shh的mRNA表达无明显变化。【结论】小鼠间充质干细胞在3.5GyΧ射线照射后出现了先凋亡后衰老的损伤规律。Fas/FasL通路在凋亡中占主要作用,p53/p21WAF1通路在细胞衰老中占主要作用。间充质干细胞放射后衰老细胞中非经典Wnt 信号高表达,非经典Wnt 信号可能参与了间充质干细胞放射后衰老的过程。【关键词】放射间充质干细胞凋亡衰老 Wnt信号TheInvestigationontheResponseofMouseMesenchymalStem Cells to 3.5Gy Χ-Irraditon and Its MechanismsDepartermentofinteralmedicine,Tongjihospital,Tongjimedicalcollege,HuazhonguniversityofscienceandtechnologyPostgraduate:HuCaihongSupervisor:Prof.SunHanyingAbstractObjective:ToinvestigatetheresponseofmousemesenchymalstemcellstomediumdoseΧ-irradiationexposureanditsmechanisms,andtheexpressionofWntsignalingintheradiationinducedcellularsenescenceofmesenchymalstemcells.Methods:ThemousemesenchymalstemcelllinesC3H10T1/2wereΧ-irradiatedatadoseof3.5Gy,Hoechst33258staining、AnnexinV/FITCstainingandflowcytometrywereperformedtodetecttheapoptosisandcellcycleandSA-β-galstainingwasusedtodetectthesenescenceatdifferenttimeafterirradiation.RealtimePCRwasperformedtoanalyzethemRNAexpressionofbothFaswithitsligandFasLandp53withitsdownstreamtargetp21WAF1.TheproteinexpressionofFaswasdeterminedby immunofluorescence.Wnt3aincanonicalWntsignal,Wnt5ainnoncanonicalWntsignalandShhsignalcrosstalkingwithWntsignalwerealldetectedinsenescentcellsat12hand72hafterradiationbyRealtimePCR.Results:BoththeHoechst33258stainingandAnnexinV/FITCstainingtechniquesdemonstratedanincreasedapoptosisafterionizingradiation,whichbeginedat3h,andreachedthepeakat12h.FasLmRNAbegantoincreaseat3h,12hpeaked,oneweekafterionizing radiation returned to normal. At the sametime,Immunofluorescence stainingshowedthatFasproteinexpressionincreasedafterirradiation,thefluorescenceintensitybegantoincreaseat6h,showedastrongpositivereactionat12handreturnedtonormalat24h.ThepercentageofSA-β-galpositivecellsandG1stage cellsweresignificantlyhigherin 72h group than in normal group(P0.01),were(55.4±5.53% vs1.8±0.9%)and(91.25±2.58%vs70.39±5.15%)respectively.TheanalysisofP53andP21WA
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